Поражение нейронов вирусом герпеса (стр. 4 из 7)

В зависимости от направленности поиска тех или иных признаков герпетической инфекции в клиническом материале эти методы условно можно подразделить на три группы :

1) методы обнаружения и выделения инфекционного ВПГ;

2) методы выявления вирусных частиц или их компонентов;

3) методы обнаружения антител к ВПГ.

При этом следует помнить, что качество результатов диагностических исследований определяется в основном сроками взятия проб после начала заболевания и во многом зависит от техники сбора, соблюдения условий первичной обработки материалов, а также от взаимодействия врачей разных специальностей (клиницистов, вирусологов, эпидемиологов) при обследовании больного. Так, частота выделения вируса наиболее высока в случае взятия материалов на исследование в ранние сроки с момента заболевания и транспортировки их в короткие сроки в оптимальных условиях (при 4⁰С, в среде со стабилизирующими веществами - 0,5%-ный желатин или 0,5%-ный альбумин бычьей сыворотки). Выбор конкретных методов диагностических исследований определяется характером течения инфекции. локализацией герпетических поражений.

1.3. Поражение нервной системы.

Нейротропизм ВПГ обусловливает развитие различных поражений центральной и периферической нервной системы (ЦНС и ПНС). Комплексные клинико- вирусологические, иммунологические и морфологические исследования выявили широкий спектр проявлений и диапазон выраженности герпетических поражений нервной системы.

В зависимости от преимущественной локализации патологического процесса выделяют:

1) локализованные поражения ЦНС;

2) локализованные поражения ПНС;

3) сочетанные поражения ЦНС и ПНС;

4) сочетанные поражения нервной и других систем организма.

В зависимости от характера течения процесса выделяют острое, подострое и хроническое (или рецидивирующее) течение. В последние годы высказывается предположение о том, что подострое и хроническое течение следует рассматривать как медленную форму герпетической инфекции ЦНС.

При герпетической инфекции нервной системы заболевание может протекать в виде полиганглионеврита (черепного, сакрального, черепно-сакрального), радику- логанглионеврита, полирадикулоганглионеврита, вегетативного полиганглионеврита, менингита, энцефалита (менингоэнцефалита), миелита, (менингомиелита), а также в виде психических заболеваний. Отдельными исследователями высказывается предположение о возможной этиологической роли ВПГ в развитии рассеянного склероза, бокового амиотрофического склероза, эпилепсии, шизофрении и др.

К числу самых тяжелых проявлений герпетической инфекции нервной системы относятся поражения ЦНС - энцефалиты и энцефаломиелиты, сопровождающиеся высокой летальностью и инвалидизацией выживших больных. В США на долю герпетических энцефалитов приходится от 10 до 20% всех случаев вирусных инфекций ЦНС, что составляет 2,3 случая на 1 миллион населения в год. Случаи заболевания регистрируются равномерно в течение года. В зависимости от возраста больного выделяют 2 пика заболеваемости: в возрасте 5-30 лет и свыше 50 лет. При этом считают, что ВПГ первого типа является этиологической причиной заболеваний в 95% случаев.

В большинстве случаев герпетические поражения ЦНС протекают в виде слабо выраженного диффузного энцефалита, герпетического менингита, малых или субклинических форм инфекции. Течение этих заболеваний относительно доброкачественное и диагностируется на основании данных вирусологических исследований. Со временем у таких больных могут развиваться хронические нервные заболевания, психические расстройства. Реже герпетические поражения протекают в виде тяжелых энцефалитов, среди которых можно выделить три формы:

1) диссеминированные диффузные менингоэнцефалиты (заболевание в основном наблюдается у новорожденных при генерализации первичной герпетической инфекции);

2) острые коматозные энцефалиты у детей;

3) очаговые поражения ЦНС у взрослых.

Клиника герпетических энцефалитов весьма схожа с клиникой других вирусных энцефалитов. Однако характерная черта некротического энцефалита - бурное течение и неблагоприятный исход. Заболевание в первые дни расценивается как респираторная вирусная инфекция. В последующем клиническая картина развивается быстро. Повышается температура, появляются общемозговые симптомы: интенсивные головные боли, вялость, апатия, дезориентация во времени и пространстве с нарушением сознания, вплоть до коматозного состояния и генерализованных некупируемых судорог.

Энцефалиты, вызванные ВПГ, имеют неблагоприятное течение и дают смертельные исходы в 50-90% случаев. Смерть может наступить на 7-20-й день болезни. Описан случай, когда смерть наступила через год от начала заболевания и была обусловлена подострым или рецидивирующим характером течения процесса. Остаточные явления, часто в виде тяжелых поражений ЦНС., остаются примерно у 50% переболевших.

Герпетический энцефалит у детей, как правило, протекает с бурной энцефалитической реакцией, почти обязательными судорогами и нарушением сознания. Меннигеальный синдром выражен относительно слабо, лишь в отдельных случаях наблюдается умеренная воспалительная реакция. Не отмечается прямой зависимости между выраженностью общеинфекционных проявлений и глубиной энцефалитических нарушений. Нормализация температуры еще не свидетельствует о регрессе инфекционного процесса. Раннее развитие коматозного состояния - неблагоприятный признак.

Патогенез герпетических энцефалитов в разных возрастных группах также различен. Так, у детей и молодых людей герпетический энцефалит- результат первичной инфекции. При этом экзогенный вирус проникает в ЦНС по нервным волокнам из первичного очага (например, по ольфакторному пути). В то же время большинство взрослых к моменту развития герпетического энцефалита имеют клинические или серологические признаки герпетической инфекции с поражениями различной локализации (например, кожи или слизистых), У этих больных поражение ЦНС может быть следствием реактивации латентного ВПГ и его последующего проникновения в ЦНС по нервным волокнам из первичного очага инфекции, длительное время находящегося в латентном состоянии непосредственно в ЦНС.

Диагностика герпетических поражений ЦНС и ПНС наиболее сложна. Она основывается на комплексном обследовании больного с целью выделения ВПГ из спинномозговой жидкости или биоптата мозга и на обнаружении внутримозгового синтеза антител к ВПГ, прежде всего вирусспецифических иммуноглобулинов, или нарастания титра антител к ВПГ в динамике заболевания.

Для ранней диагностики герпетического энцефалита наряду со специфическими методами экспресс-диагностики рекомендуется использовать неинвазивные пара- клинические методы исследования - электроэнцефалографию и компьютерную томографию.

Рис. 1. Схема структуры вириона ВПГ (гликопротеиды внешней оболочки): gB - ответствен за инфекционность; g.D - ответствен за инфекционность и индукцию нейтрализующих антител; gC - связывается с СЗb компонентом комплемента; gE - связывается с Fc - фрагментом иммуноглобулинов класса G; gG - по-видимому, ответствен за специфический серологический ответ (так как имеет небольшую перекрестную реактивность у ВПГ первого и второго типов); VP₅ - основной белок капсида; VR₁₆ - входит в состав оболочки; ДНК - геном ВПГ

ГЛАВА 2. Методика исследований.

2.1. Гистологические препараты.

В работе использовались препараты головного мозга (лобный полюс поле 4). Для получения подобных препаратов используется два основных метода изготовления срезов: заливка мозга в парафин и замораживание. Так как мозг содержит от 70 ( в волокнах ) до 80% воды ( в клетках ), то его нужно обезвоживать, заменяя воду заливочным материалом. Для удаления воды можно использовать соединения, обладающие большим сродством к ней ( например, этанол ). Чтобы свести повреждение ткани до минимума, эти соединения используют в возрастающих концентрациях. Тем не менее при обработке мозг уменьшается в объеме почти на 7%.

Затем переходят к просветлению и пропитыванию тканей. Для просветления используют вещества, смешивающиеся как с парафином, так и со спиртом, например ксилол, в который помещают кусочек ткани, вынув его из спирта; при этом ткань несколько раз переносят в свежие порции ксилола, пока весь спирт не замещается ксилолом. Затем ткань помещают в жидкий парафин, в котором она остается до тех пор, пока весь ксилол не будет замещен парафином; этот этап называют пропитыванием. После того как блок затвердеет, залитый мозг готов для изготовления срезов. Для обычного исследования в световом микроскопе толщина срезов не должна превышать 5-8 мкм.

Другой метод- приготовление замороженных срезов занимает гораздо меньше времени, чем изготовление парафиновых срезов. Для их изготовления мозг обрабатывают растворами формалина с сахорозой в возрастающих концентрациях. В целом замороженные срезы менее удобны, чем парафиновые, так как кристалики льдаа повреждают ткань. Замороженные тткани не удается нарезать так же тонко, и толщина приготовленных из них срезов обычно достигает 10 мкм.

Поскольку различные компаненты живых клеток имеют сходные опттические плотности, все они уменьшают амплитуду проходящих через них световых волн примерно в одинаковой степени, так что ни один из них не кажется темнее или светлее других. Поэтому для создания достаточного контраста между разными компанентами клеток и тканей, позволяющего исследовать их в обыкновенном световом микроскопе, используют метод окрашивания. Красители поглощаются разными компанентами клеток и тканей в различной степени и могут создавать контрастность различными способами. Обычно используют два красителя: сначала одним окрашивают часть компанентов в один цвет, а затем другим окрашивают остальные компаненты в контрастный цвет.