Для ускорения созревания половых продуктов производителей стимулируют эколого-физиологическим методом, который заключается в обеспечении условий максимально приближенных к естественным (t=18-22оС, pH=7-7,5, содержание О2=5-6 мг/л), а также в введении физиологического препарата гипофиза.
Гипофиз, или нижний мозговой придаток, — железа внутренней секреции, расположенная у основания головного мозга. Гипофиз выделяет в кровеносную систему организма гормоны. Гонадотропный гормон гипофиза регулирует оогенез и сперматогенез, вызывает созревание половых клеток, овуляцию и образование спермы. Выделяемый гипофизом гонадотропный гормон поступает в кровь и стимулирует созревание половых клеток, а также выход зрелых яиц (икринок) из фолликул и образование спермы. Во время нереста производители рыб выметывают зрелые половые продукты не все сразу, а постепенно. Так, самка выметывает икринки в воду по мере их овуляции. Совершаемые самкой движения приводят к разрыву следующих фолликул и продолжению вымета икринок.
Перед началом работ по инъецированию производителей заготовленные гипофизы карпа, сазана или карася (также можно использовать заменитель – хореогонический гонадотропин) растирают в фарфоровой ступке в порошок, затем заливают физиологическим раствором (65 мг поваренной соли, растворенной в 100 мл дистиллированной воды) и тщательно перемешивают. Полученную суспензию гипофиза вводят с помощью шприца в спинные мышцы производителей. При этом доза инъецируемого рыбе гипофиза определяется качеством получаемых половых продуктов. Недостаточное количество гипофиза не обеспечивает созревания половых желез, а избыточное — резко снижает качество получаемых половых продуктов.
Водную суспензию гипофиза вводят в мышцы спины первой трети тела (под острым углом к поверхности тела) выше боковой линии и ниже основания спинного плавника с помощью шприца «Рекорд». Иглу вводят под чешую. Место укола после извлечения иглы зажимают пальцем во избежание вытекания суспензии и слегка массируют. Эта работа проводится в брезентовых носилках с водой.
Самкам с половыми железами в завершенной четвертой стадии зрелости делают предварительную гипофизарную инъекцию из расчета 3 мг сухого гипофиза при массе 5—-7 кг, а 5—6 мг препарата — более крупным самкам. Через сутки после предварительной производится разрешающая инъекция по 3—6 мг препарата на 1 кг массы самки в зависимости от размеров гонад, а также инъецируют самцов. Самцам массой 5—7 кг вводят 4—6, более крупным — до 10—12 мг сухого вещества гипофиза на одну рыбу.
Дозировки рассчитывают на 1 кг массы рыбы с учетом температуры воды (табл.1).
Таблица 1
Необходимое количество препарата гипофиза для производителей растительноядных рыб
Температура воды в период созревания | Доза препарата на 1кг массы, мг | Время созревания, ч |
16-18°С | 3,5 | 26-22 |
18-20°С | 3,0 | 22-18 |
20-22°С | 2,5 | 18-14 |
Время инъецирования производителей выбирают, учитывая температуру воды и скорость созревания самок, таким образом, чтобы получение и осеменение икры, раскладка ее в аппараты для инкубации приходились на светлое время суток.
Предварительную инъекцию проводят, как правило, в 18—19 ч. вечера, разрешающую — начиная с этого времени и позднее. Однако при резких похолоданиях ночью инъекции иногда осуществляют в утренние часы. Скорость созревания самок после разрешающей инъекции сильно зависит от температуры воды и определяется таким образом: при температуре 20—22°С созревание наступает через 10—12 ч, при 23—25° —9—11, при 26—28°С — через 7—10 ч.
На вторые-третьи сутки инъецируют самцов за 1 ч до проведения разрешающей инъекции самкам.
Через 6—9 ч после инъекций начинают регулярно проверять состояние зрелости производителей. Интервал между этими проверками определяется в зависимости от температуры воды в течение суток, возраста и состояния производителей, но не может быть больше чем 1,5—2 ч. Это связано с опасностью перезревания. Для удобства работы производителей разного размера, происхождения, степени зрелости желательно группировать. Разнородных производителей осматривают, пересаживая их в свободный и заполненный водой садок или контейнер. Определение точного времени созревания очень важно. Созревание половых продуктов, происходит через 10-12 ч после разрешающей инъекции (при температуре воды 20°С) (Козлов, 1980).
4.2. Получение половых клеток, осеменение икры, подготовка икры к инкубации
Половые продукты у производителей растительноядных рыб (белый и пестрый толстолобики, белый амур) получают способом отцеживания. Созревших самок отлавливают из садков, тщательно протирают марлей, голову и анальный плавник обертывают сухой салфеткой. Голову рыбы прижимают локтем левой руки к телу, а кистью этой руки держат хвостовой стебель в таком положении, чтобы генитальное отверстие находилось над краем чистой посуды (эмалированный или пластиковый таз), а брюшко было слегка выгнуто наружу. От давления стенок брюшной полости часть икры выделяется из генитального отверстия, попадая на край посуды, стекает на дно. Нельзя допускать прямого попадания икринок на дно посуды, так как они легко повреждаются. После прекращения свободного вытекания икры брюшко самки слегка сдавливают и массируют пальцами правой руки к анальному плавнику. С появлением комочков икры и капель крови отцеживание прекращают.
Количество икры учитывают объемным или весовым методом. Объемный метод: берут три контрольные пробы по 50-100 мл, просчитывают их и находят среднее количество икринок, содержащиеся в 1 мл. Затем мерным стаканом или кружкой измеряют объем всей собранной икры. Общий объем умножают на среднее количество икринок в 1 мл и получают количество собранной икры в тыс. шт. Весовой метод: икру собирают в тарированные тазы, заранее взвешенные. После отцеживания икры таз с ней вновь взвешивают, и по разнице масс определяют массу икры. Из таза берут три пробы по 10 г каждая, определяют количество икринок в каждой пробе и находят среднее количество в 1 г. Затем массу собранной икры умножают на найденную среднюю величину и получают общее количество икры в штуках. Плодовитость самок белого амура и толстолобиков от 10 тыс до 2 млн икринок.
Заготовку спермы от самцов проводят также методом отцеживания, массируя брюшко. Затем помещают ее в отдельные пробирки за 30-60 мин. до получения икры, хранят их в термосе со льдом.
Определение качества спермы проводят визуально. Сперма хорошего качества имеет консистенцию сливок, умеренную густоту и белую окраску. Определение качества спермы проводят по измерению объема эякулята, продолжительности движения сперматозоидов, по соотношению живых и мертвых спермиев. Икра должна быть неповрежденной, иметь определенный размер и цвет.
Икру осеменяют сухим способом. Икру от 3-5 самок, смоченную полостной жидкостью, сцеживают в чистую емкость. Затем в нее вливают сперму от 2-3 самцов, осторожно помешивая гусиным пером. Добавляют немного воды, делают паузу в 2-5 мин. На 1 кг икры используют 5 мл спермы.
Икра растительноядных рыб слабоклейкая, поэтому ее перед закладкой в инкубационные аппараты не обесклеивают, промывают водой от органики в течение 5 мин.
4.3 Инкубация икры
Инкубация икры растительноядных рыб будет осуществляться в инкубационных аппаратах “ВНИИПРХ”, емкостью 200 л (рис. 8).
Рис. 8. Инкубационный аппарат «ВНИИПРХ»
1-сливной патрубок; 2-инкубационная емкость; 3-подающий патрубок.
Аппарат представляет собой сосуд из органического стекла, состоящий из инкубационной емкости, подающего и сливного патрубков.
Оптимальная температура воды при инкубации должна быть 22-25°С, а содержание кислорода в воде аппаратов - не менее 4 мг/л. Выживаемость личинок от икры - 50 %. В момент загрузки икры, аппараты должны быть заполнены водой на 1/3 объема, а подача воды в аппараты приостановлена. Решающее значение при проведении инкубации икры имеют температурный и кислородный режим. После загрузки икры устанавливают проточность 4-8 л/мин. В воде икра быстро набухает и через 5-6 минут ее объем удваивается. Процесс набухания икры завершается через 2 часа. После этого устанавливают оптимальную поточность воды в инкубационных аппаратах. Инкубация икры при температуре 21-25 ºС длится 23-33 часа.
Уход за икрой во время инкубации заключается в контроле за ее развитием, в регулировании водоподачи в инкубационные аппараты, отборе мертвой икры. Сифоном следует отбирать мертвую икру, которая в виде мутно-белого слоя концентрируется над живой икрой. За 3-5 часов до вылупления предличинок под бинокуляром просматривают 100-150 икринок и определяют процент нормально развивающихся эмбрионов.
При высоком качестве икры и нормальных условиях инкубации, выход свободных эмбрионов растительноядных рыб составляет не менее 70-80 % от количества заложенной на инкубацию икры.
4.4 Выдерживание предличинок и их подращивание
4.4.1. Выдерживание предличинок. Выдерживание предличинок будет осуществляться в аппаратах ИВЛ-2 (рис.9).
Рис. 9. Аппарат ИВЛ-2
1-оградительное сито; 2-сливной патрубок; 3-емкость; 4-рассекатель потока воды; 5-подающий патрубок; 6-герметическая заслонка.