Окрашенные мазки изучали с помощью системы анализа изображений «ВидеоТест - Морфо», которая представляет собой автоматизированное рабочее место, предназначенное для проведения морфологического, стереологического и морфометрического анализа изображений со статистической обработкой полученных результатов. Мазок устанавливается под микроскоп, соединенный с TV-камерой. Телевизионный сигнал с TV-камеры передавался на плато ввода изображений и для визуализации на монитор видеоконтрольного устройства или видеоокно монитора компьютера. В плате ввода TV-сигнал оцифровывался, и изображение в цифровой форме передалось в ОЗУ компьютера для обработки и анализа. Программа позволила получить измерения различных параметров эритроцитов, провести статистическую обработку результатов, получить графики зависимости параметров [53].
Статистическую обработку полученных результатов выполняли по общепринятым методикам [1, 40, 47] в программе «MicrosoftExel 2003». Для расчета ряда показателей использовались стандартные статистические показатели, такие как: среднее значение - М, ошибка средней - m, среднеквадратическое отклонение - σ и коэффициент вариации - CV. Для подтверждения достоверности различий использовали критерий Стьюдента – St.
3 Характеристика крови линя, выращенного в искусственных условиях УЗВ
3.1 Характеристика крови двухгодовалого линя.
Для оценки физиологического состояния выращенной рыбы использовали концентрационные показатели крови, а также лейкоцитарную формулу, которые характеризуют белковый обмен, дыхательную и защитную функции организма.
Средняя масса исследованных двухгодовалых линей составляла 13 г, средняя длина – 75,4 мм. Результаты исследования морфофизиологических характеристик линя представлена в таблице 3.
Таблица 3 – Морфофизиологическая характеристика двухлетков линя
Показатель | М±m | σ | CV, % |
Mасса, г | 13,00±2,17 | 9,24 | 12,2 |
Длина, мм | 75,40±4,13 | 4,85 | 37,3 |
P порки, г | 9,80±1,75 | 3,91 | 39,9 |
Индекс почки, % | 8,60±0,76 | 1,70 | 19,8 |
Индекс печени,% | 15,50±1,48 | 3,31 | 21,4 |
Индекс селезенки, % | 4,00±0,77 | 1,72 | 42,8 |
Масса и длина двухлетков линя, выращенных в условиях УЗВ, не отличались от таковых показателей у линей такого же возраста из естественных условий [6].
Лейкоцитарная формула линя представлена в таблице 4 и на рисунке 4
Таблица 4 - Лейкоцитарная формула линя, %
Лейкоциты | М±m | σ | CV, % |
Мн | 2,63±1,71 | 2,95 | 112,6 |
Ммн | 0,13±0,14 | 0,25 | 200,0 |
Пн | 0,50±0,41 | 0,71 | 141,4 |
Сн | 0,13±0,14 | 0,25 | 200,0 |
ОЧН | 3,38±1,48 | 2,56 | 75,9 |
ПЭ | 12,00±6,82 | 11,80 | 98,4 |
Мо | 1,75±1,17 | 2,02 | 115,47 |
Блф | 7,00±1,20 | 2,08 | 29,7 |
Млф | 75,88±8,26 | 14,30 | 18,85 |
ОЧЛф | 82,88±7,14 | 12,37 | 15,91 |
Рисунок 4 - Лейкоцитарная формула двухгодовалых линей, выращенных в УЗВ
Общее количество нейтрофилов в крови линя составило 3,38%. Среди них преобладали юные нейтрофилы – миелоциты, что свидетельствует об активации нейтрофилопоэза. Обращает на себя внимание высокий процент псевдоэозинофилов (12,0±6,82). Что, вероятно, связано со специфическими условиями в УЗВ.
3.2 Характеристика крови производителей линя, выращенных в условиях УЗВ
Морфофизиологические показатели, исследованных производителей линей представлены в таблице 5 и на рисунке 5.
Таблица 5 – Морфофизиологические показатели производителей линя
Показатель | Самцы | Самки | ||
M ± m | CV, % | M ± m | CV, % | |
Длина, мм | 260,00±10,66 | 8,2 | 283,50±8,17 | 5,0 |
Масса, г | 588,00±53,77 | 18,3 | 651,20±41,91 | 11,2 |
Рисунок 5 – Длина и масса производителей линя, выращенных в УЗВ
Применение критерия Стьюдента показало, что между самками и самцами по длине и массе нет достоверных различий.
Гематологическая характеристика производителей линя, выращенных в условиях УЗВ, представлена в таблице 6.
Таблица 6 – Гематологическая характеристика производителей линя, выращенных в УЗВ
Параметры | Самцы | Самки | ||
M ± m | CV, % | M ± m | CV, % | |
Hb, г*л-1 ОБС, г*л-1 Эр, Т*л-1 СГЭ, пг Л, Г*л-1 Эр/Л | 47,19±3,28 36,2±7,911 1,470±0,100 32,18±1,66 67,00±19,63 11,66±3,45 | 13,9 43,7 13,7 10,0 58,6 59,2 | 34,66±13,45 61,25±7,141 1,28±0,07 36,18±1,72 101,88±11,081 8,32±3,24 | 67,2 20,2 9,0 8,2 23,1 67,5 |
Лейкоцитарная формула, % | ||||
Мн Ммн Пн Сн ОЧН Э Мо Блф Млф ОЧЛф | 2,50±0,62 2,38±1,67 1,38±0,37 0,13±0,41 7,38±1,88 6,25±1,68 1,25±0,47 10,75±1,92 74,38±2,49 85,13±2,78 | 56,6 75,7 34,8 66,7 61,8 48,2 69,3 25,6 5,3 45,2 | 3,00±0,82 3,88±0,36 0,25±0,17 0,50±0,33 7,63±1,23 4,88±1,04 2,25±1,67 11,88±1,77 73,38±1,61 85,25±0,83 | 47,1 16,2 115,5 115,5 28,0 36,9 128,9 25,8 3,8 1,7 |
различия достоверны при (при р<0,05)
Лейкоцитарный состав крови производителей линя, выращенных в УЗВ, представлен основными группами клеток: агранулоцитами – лимфоцитами (большими и малыми) и моноцитами, и гранулоцитами – нейтрофильными миелоцитами и метамиелоцитами, палочко- и сегментоядерными нейтрофилами, эозинофилами. Общее число нейтрофилов в крови самок и самцов линя составило 7,63±1,23 и 7,38±1,88% соответственно; общее число лимфоцитов - 85,13±2,78 и 85,25±0,83%. Достоверных различий в лейкоцитарной формуле между самками и самцами линя нами не обнаружено, что подтверждает единообразие клеточного состава белой крови внутри вида среди одновозрастных рыб и отражает отсутствие полового диморфизма по этому показателю у линя такого возраста и физиологического состояния. На рисунке 6 представлена лейкоцитарная формула производителей линя.
Применение критерия Стьюдента показало, что концентрация общего белка в сыворотке крови самок, выращенных в условиях УЗВ, достоверно выше в сравнении с самцами (61,25±7,14 против 36,2±7,91) (рисунок 7). Вероятно, это было связано с особенностями метаболизма у самок в период формирования ооцитов.
Рисунок 6 – Лейкоцитарная формула производителей линя, выращенных в УЗВ
Рисунок 7 – Достоверные различия ОБС в крови производителей линя, выращенных в УЗВ
Цитометрические параметры эритроцитов производителей линя, выращенных в УЗВ. В периферической крови производителей линя, выращенных в условиях УЗВ, наблюдались здоровые, правильной формы эритроциты. Результаты анализа этих клеток представлены в таблице 7.
Эритроциты линя мелкие эллипсоидные клетки, средняя площадь которых составляет у самцов 94,06 мкм2, периметр 36,63 мкм, у самок площадь эритроцитов - 87, мкм2 периметр - 35,06 мкм. Применение критерия Стьюдента показало, что площадь, периметр, большая и малая оси эритроцитов самцов достоверно больше значений этих параметров эритроцитов самок (при р<0,001) (рисунки 8, 9).
Таблица 7 – Параметры эритроцитов производителей линя, выращенных в УЗВ
Показатель | Самцы | Самки | ||
M ± m | CV, % | M ± m | CV, % | |
S, мкм2 P, мкм Fk Fе Fо А, мкм В, мкм А/В | 94,060±0,7581 36,630±0,1861 0,8814±0,0039 0,9981±0,0000 0,6344±0,0069 13,900±0,1091 8,659±0,0551 1,624±0,019 | 11,2 7,0 6,2 0,1 15,0 10,9 8,9 16,8 | 87,300±0,8821 35,060±0,1921 0,8916±0,0408 0,9981±0,0000 0,6324±0,0064 13,360±0,1031 8,371±0,0591 1,612±0,017 | 11,2 6,4 4,6 0,1 11,2 8,5 7,8 12,0 |
1, 2, 3 – различия достоверны соответственно при р< 0,05, 0,01 и 0,001