Изучение антиоксидантной активности растений (стр. 5 из 8)
3. Подготовка пробы чая к анализу для определения содержания танина.
2,5 г предварительно измельченной навески чая, взятой из средней пробы, с погрешностью взвешивания не более 0,0002 г, помещают в колбу вместимостью 250 см3, приливают 200 см3 кипящей дистиллированной воды и ставят на водяную баню. Экстракцию ведут в течение 45 минут. Экстракт фильтруют под вакуумом через воронку Бюхнера в колбу вместимостью 500 см3, фильтрат переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3, охлаждают и доводят дистиллированной водой до метки.
2.3 Методы исследования
Определение влажности плодов
Растереть в ступке 2 г плодов. Полученную массу поместить в бюкс, массу которого определить заранее. Бюкс поставить в эксикатор при температуре 70ºС на сутки. По истечении времени измерить массу бюкса. Вычислить абсолютно сухое вещество по формуле:
Mа.с.в.= m1-m2,
Где: Mа.с.в- - масса абсолютно сухого вещества;
m1 – масса пустого бюкса;
m2 – масса бюкса с плодами после высушивания.
Влажность вычислить по формуле:
W= ((а 1 - а 2 )\ а1) • 100%,
Где:
W- влажность,%;
а 1- масса навески до высушивания, г;
а 2 - масса навески после высушивания, г [33].
Определение витамина С в исследуемых материалах
2 г плодов растереть в ступке. Полученную массу перенести в стаканчик и добавить 10 мл 2% раствора HCl. Тщательно перемешать и отфильтровать через стеклянную воронку с ватой в коническую колбу на 50-100 мл. Массу на фильтре промыть несколькими каплями воды. В фильтрат прилить 1 мл 0,5% раствора крахмала и оттитровать рабочим раствором 0.003 Н йода до появления синего окрашивания.
При расчете содержания витамина С в продукте использовать формулу определения массы:
М= ((н•Э)\1000)•V,
Где : н- молярная концентрация эквивалента йода;
Э- молярная концентрация эквивалента витамина С, равная 88 г;
V- объем пошедшего на титрование йода, мл.
Для более точного количественного определения витамина С проводить параллельные опыты [33].
Определение содержания танина в чае [36]
Определение проводилось согласно ГОСТ 19885-74.
Метод основан на окислении танина чая марганцевокислым калием в присутствии индигокармина в качестве индикатора.
Пипеткой отбирают 10 см3 экстракта и помещают в выпарительную чашу, добавляют 750 см3 водопроводной воды, 25 см3 раствора индигокармина и титруют 0,1 моль/дм3 раствором марганцовокислого калия при постоянном перемешивании стеклянной палочкой. Синяя окраска при этом постепенно переходит через сине-зеленую, темно- и светло-зеленую, желто-зеленую в желтую золотистого оттенка.
Конец реакции определяют по исчезновению зеленого оттенка и появлению чистого желтого цвета. Затем подсчитывают количество 0,1 моль/дм3 раствора марганцовокислого калия в см3, израсходованное на окисление танина.
Аналогичным образом устанавливают количество марганцовокислого калия, израсходованное на титрование раствора воды и индигокармина.
Количество танина (А1) в процентах определяют по формуле:
,где а – количество 0,1 моль/дм3 раствора марганцовокислого калия, израсходованное на окисление танина, см3;
а1 – количество 0,1 моль/дм3 раствора марганцовокислого калия, израсходованное на титрование раствора воды и индигокармина, см3;
0,004157 – количество танина, окисляемое 1 см3 0,1 моль/дм3 раствора марганцовокислого калия, г;
υ – количество полученного экстракта чая, см3;
υ1 – количество экстракта чая, взятое для испытания, см3;
m – масса навески абсолютно сухого чая, г;
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0,5% для р=0,95.
Если результат анализа попадает вблизи значения нормы содержания танина для соответствующего вида чая, то необходимо проведение двух дополнительных определений. В этом случае за результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0,7% для р=0,95. [9]
Определение влияния компонентов чая на антиоксидантную активность
Количество витамина С в лимоне обыкновенном определяют по методике.
В экстракт чая каждого из сортов добавить 2 мл сока лимона, определить содержание витамина С. Через 1 час находят содержание аскорбиновой кислоты в каждом из сортов. Сравнивают содержание витамина С до и после выдерживаемого времени [33].
Глава 3. Результаты исследования и их обсуждение. Изучение антиоксидантной активности растений
3.1 Определение содержания витамина С в калине обыкновенной в период созревания
В измельченной массе плодов калины обыкновенной определили влажность всех отбираемых образцов. Влажность плодов калины обыкновенной во время созревания в период с 12.09 по 31.10 варьирует в пределах от 60% до 78,5%. Наибольшая влажность в плодах калины обыкновенной отмечмна в период созревания с 12 по 19 октября.
W,%
Рисунок 1. Влажность плодов калины обыкновенной в период созревания
Общеизвестно, что в калине высокое содержание витамина С. Плоды калины обыкновенной широко используют в качестве источника этого витамина.
С 12.03.2007 г по 31. 10. 2007 г с периодичностью в 3 дня были отобраны плоды калины обыкновенной, произрастающей в п. Кубрис Славянского района.
Используя метод йодиметрического титрования, определили содержание витамина С в каждой пробе согласно методике.
Анализ результатов показал, что содержание витамина С меняется в период созревания и зависит от срока созревания плодов калины обыкновенной. В период с 12 сентября по 12 октября содержание аскорбиновой кислоты изменяется с 1,44г по 2,78г на 100 г а.с.в. В период с 12 по 19 октября отмечена наибольшая интенсивность накопления витамина С, что составляет 3,1г кислоты на 100г сухого вещества. В период с 19 по 31 октября содержание падает до 2,37г на 100г сухого вещества.
Проследив динамику изменения витамина С можно сделать вывод о том, что оптимальным временем сбора калины является период с 12 по 19 октября, так как в этот период происходит максимальное накопление аскорбиновой кислоты в плодах калины обыкновенной.
3.2 Определение антиоксидантной активности лимона обыкновенного, шиповника коричного и различных сортов чая
Антиоксидантную активность растительных материалов определяли по содержанию витамина С методом йодиметрического титрования аналогично определению содержания витамина С в калине обыкновенной. Для исследования были взяты следующие растительные материалы: лимон обыкновенный, калину обыкновенная, шиповник коричный и сорта чая: мате зеленый, красный чай «Ройбуш», белыйчай «Ветер поднебесный», зеленый чай«Лазурная россыпь» и черный чай «Лисма».
Полученные результаты представлены на рисунках 3,4.
Из полученных результатов видно, что самое высокое содержание витамина С в калине обыкновенной – 3,1 г/ 100 г а.с.в., в шиповнике витамина меньше по сравнению с содержанием его в калине и составляет 1,2 г/ 100 г а.с.в. Содержание аскорбиновой кислоты в лимоне обыкновенном – 0,04 г/ 100 г а.с.в., что по значению меньше, чем содержание витамина в калине и шиповнике.
Для анализа антиоксидантной активности сортов чая было определено содержание витамина С в мате зеленом, красном чае «Ройбуш», беломчае «Ветер поднебесный», зеленом чае«Лазурная россыпь» и черном чае «Лисма». Полученные результаты исследования приведены на рисунке 4.
Из полученных результатов видно, что содержание витамина С зависит от сорта чая. Определено, что в наибольшем количестве аскорбиновая кислота содержится в черном чае. В чае мате и в красном чае содержание витамина С наименьшее по сравнению с другими сортами чая.
3.3 Определение содержания полифенольных соединений в различных сортах чая
Для исследования использовались экстракты нескольких сортов чая: мате зеленый, красный чай «Ройбуш», белыйчай «Ветер поднебесный», зеленый чай«Лазурная россыпь» и черный чай «Лисма».
Содержание полифенольных соединений проводили согласно ГОСТ 19885-74 . Измельченную навеску чая поместили в колбу залили кипящей дистиллированной воды и выдержали 45 минут. В фильтрате экстракта каждого сорта чая определили содержание полифенольных соединений.
Определение количества полифенольных соединений проведено в перерасчете на танин. Результаты исследования показаны на рисунке 5.
Анализ полученных результатов показал, что содержание полифенольных соединений в экстрактах чая имеет разное значение и зависит от сорта чая. Наибольшее содержание танина в белом чае. Наименьшее содержание танина из исследуемых материалов содержится в зеленом и красном чаях.
3.4 Влияние компонентов чая на антиоксидантную активность
Количество витамина С в лимоне обыкновенном определяли по методике.
В экстракт чая каждого из сортов добавили сок лимона и определили содержание витамина С. Изменение антиоксидантной активности определяли по изменению содержания витамина С в экстрактах чая каждого сорта до и после времени выдержки. Полученные результаты показали, что во время выдержки концентрация витамина снизилась. Далее рассчитывали процент снижения содержания витамина С. Полученные результаты представлены на рисунке 6.