Стерилизация насыщенным паром под давлением — автоклавирование.Данный способ стерилизации питательных сред является наиболее надежным и чаще всего применяемым. Он основан на нагревании материала насыщенным водяным паром при давлении выше атмосферного. Среды обычно стерилизуют в пробирках, колбах, бутылях. Емкости заполняют средой не более чем на половину их высоты, чтобы предотвратить смачивание пробок. Сосуды со средами закрывают ватными пробками. Они предохраняют среду от заражения микроорганизмами, находящимися в окружающем воздухе.
Пробки должны быть достаточно плотными.
Основной способ стерилизации стеклянной посуды — обработка сухим горячим воздухом при температуре не выше 180 °С в течение 1 — 3 ч. При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации.
Подготовка посуды к стерилизации. Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением.
Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в стерилизатор (или сушильный шкаф) не слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. Посуду можно стерилизовать и в автоклаве. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла. Для автоклавирования посуду готовят, как и для сухожаровой стерилизации.(Нетрусов, 2005).
Для выявления, изучения и учета численности микроорганизмов, а в данном случае микроскопических грибов, используют методы посева на плотные питательные среды. Метод посева остается одним из распространенных в практике исследования микроорганизмов, вследствие, того, что позволяет, не только учитывать количество, но и групповой (а часто и видовой) состав микрофлоры, а также позволяет из изолированных колоний, выросших на чашках, выделить микроорганизмы в чистые культуры для дальнейшего исследования и идентификации (Теппер,1987).
Техника посева
На плотные питательные среды посев делают преимущественно поверхностно. Для этого агаризованные питательные среды разливают в стерильные чашки Петри и после охлаждения подсушивают в термостате при 40°С. На поверхность агаровой пластины стерильной градуированной пипеткой наносят 0,05 мл почвенной суспензии, затем стеклянным шпателем Дригальского растирают каплю досуха, при этом открытую чашку держат в вертикальном положении около пламени горелки.
Можно поверхностный посев производить ватным тампоном, которым отбиралась проба. Тампон отжимают от излишней воды и втирают оставшуюся жидкость (культуральная или стерильная вода) в агар.
Засеянные чашки переворачивают вверх дном и помещают в термостат. Сроки учета микроорганизмов зависят от состава среды и группы учитываемых микроорганизмов. (Теппер, 1987)
В данном случае посев осуществлялся на следующие среды:
- среда Чапека с добавлением молочной кислоты для подавления бактериальной микрофлоры – для выделения микроскопических грибов;
- глюкозо-пептонная среда (Сабуро) – для выделения микроскопических грибов и дрожжей;
- среда Частухина для выделения целлюлозоразрушающих микрорганизмов.
Таблица № 1. Численность и морфология микроорганизмов – обрастателей памятной доски.
| Агар | Кол-во отд. колоний | Культуральные признаки | Морфологические признаки |
| Чапека | 17 | Гриб черного цвета; форма колонии круглая; воздушный мицелий крупинчатый; профиль выпуклый; края неровные; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата. | Мицелий септированный;конидиеносцы одноклеточные,грушевидно вздутые;стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.Aspergillus niger. |
| 5 | Гриб серого цвета; воздушный мицелий бархатистый; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата; пигмента не обнаружено | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные, собраны в параллельные цепочки. Aspergillus flavus. | |
| 3 | Гриб сизого цвета; воздушный мицелий бархатистый; форма расползающаяся; края неровные; профиль колонии плоский; субстратный мицелий хорошо развит; дает коричневато-красный пигмент. | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные. Penicillium citrinum. | |
| 2 | Гриб белого цвета; воздушный мицелий ватный, пышный; форма колонии круглая, расползающаяся; профиль колонии кратеровидный; край неровный; субстратный мицелий частично стелется по поверхности; наличие розовой пигментации. | Мицелий септированный; конидиеносцы разветвленные, заострены на концах, продолговатые. Fusarium. | |
| Сабуро | 1 | Гриб черного цвета; форма колонии круглая; воздушный мицелий крупинчатый; профиль выпуклый; края неровные; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата. | Мицелий септированный;конидиеносцы одноклеточные,грушевидно вздутые;стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.Aspergillus niger. |
| 7 | Гриб серого цвета; воздушный мицелий бархатистый; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата; пигмента не обнаружено | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные, собраны в параллельные цепочки. Aspergillus flavus. | |
| 1 | Гриб сине-зеленого цвета, разросшийся по чашке; воздушный мицелий бархатистый; субстратный частично стелется по поверхности; пигмент желтого цвета. | Гифы септированные, бесцветные; конидиеносцы разветвленные, иногда в пирамидальных скоплениях; фиалиды вздутые у основания. Trichoderma. | |
| 6 | Колония розового цвета; слизистая;форма колонии круглая;профиль плоский;края ровные;поверхность гладкая;структура однородная. | дрожжи |
Таблица № 2. Численность и морфология микроорганизмов – обрастателей монумента ВОВ.
| Агар | Кол-во отд. колоний | Культуральные признаки | Морфологические признаки |
| Чапека | 2 | Гриб грязно-зеленого цвета; воздушный мицелий бархатистый; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата; пигмент по краю коричневый. | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные, собраны в параллельные цепочки. Aspergillus flavus. |
| Сплошной зарост грибом черного цвета; форма колонии круглая; воздушный мицелий крупинчатый; профиль выпуклый; края неровные; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата. | Мицелий септированный;конидиеносцы одноклеточные,грушевидно вздутые;стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.Aspergillus niger. | ||
| Сабуро | 2 | Гриб сизого цвета; воздушный мицелий бархатистый; форма расползающаяся; края неровные; профиль колонии плоский; субстратный мицелий хорошо развит; дает коричневато-красный пигмент. | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные. Penicillium citrinum. |
| 3 | Гриб черного цвета; форма колонии круглая; воздушный мицелий крупинчатый; профиль выпуклый; края неровные; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата. | Мицелий септированный;конидиеносцы одноклеточные,грушевидно вздутые;стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.Aspergillus niger. | |
| 1 | Гриб сине-зеленого цвета, разросшийся по чашке; воздушный мицелий бархатистый; субстратный частично стелется по поверхности; пигмент желтого цвета. | Гифы септированные, бесцветные; конидиеносцы разветвленные, иногда в пирамидальных скоплениях; фиалиды вздутые у основания. Trichoderma. | |
| 6 | Колония белого цвета; слизистая;форма колонии круглая;профиль плоский;края ровные;поверхность гладкая;структура однородная. | дрожжи |
Таблица № 3. Численность и морфология микроорганизмов – обрастателей памятника жертвам репрессий.
| Агар | Кол-во отд. колоний | Культуральные признаки | Морфологические признаки |
| Чапека | Сплошной зарост грибом грязно-зеленого цвета; воздушный мицелий бархатистый; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата; пигмент по краю коричневый. | Мицелий септированный;конидиеносцы мутовчато расположенные;конидии шаровидные, собраны в параллельные цепочки. Aspergillus flavus. | |
| Сабуро | 2 | Гриб черного цвета; форма колонии круглая; воздушный мицелий крупинчатый; профиль выпуклый; края неровные; субстратный мицелий частично стелется по поверхности субстрата. | Мицелий септированный;конидиеносцы одноклеточные,грушевидно вздутые;стеригмы в споровых головках расположены в два ряда друг над другом и заканчиваются цепочками спор с гладкой или бородавчатой поверхностью.Aspergillus niger. |
| 1 | Гриб сине-зеленого цвета,разросшийся по чашке;воздушный мицелий бархатистый;субстратный частично стелется по поверхности;пигмент желтый. | Гифы септированные, бесцветные; конидиеносцы разветвленные, иногда в пирамидальных скоплениях; фиалиды вздутые у основания. Trichoderma. | |
| Колония розового цвета; слизистая;форма колонии круглая;профиль плоский;края ровные;поверхность гладкая;структура однородная. | дрожжи | ||
| Колония белого цвета; слизистая;форма колонии круглая;профиль плоский;края ровные;поверхность гладкая;структура однородная. | дрожжи |
Таблица № 4. Численность и морфология микроорганизмов – обрастателей картины (внешняя сторона).