Класс жгутиковые: лейшмании, трихомонады, лямблии, трипаносомы (стр. 2 из 4)
Диагностика.
При постановке клинического диагноза указанные выше основные симптомы заболевания являются опорными. Следует учитывать эпидемиологические данные
(проживание в неблагополучных по лейшманиозу местах и т.д.). Окончательный и достоверный диагноз висцерального лейшманиоза ставится на основании обнаружения возбудителя.
Исследование пунктата костного мозга
С целью обнаружения возбудителя висцерального лейшманиоза, а в ряде случаев и других простейших исследуют костный мозг.
Костный мозг получают, пунктируя гребень подвздошной, головку большеберцовой кости или грудину. Во всех случаях пункция является ответственной процедурой и производится только врачом.
Полученный при пункции костный мозг помещают на предметное стекло и, осторожно размазывая тонким слоем с помощью шлифованного стекла, готовят мазок. При значительной примеси крови в пунктате на стекле находят маленькие белые комочки и готовят из них мазки.
Фиксация мазка. Мазок сушат на воздухе, фиксируют 30 мин в абсолютном этиловом спирте или 5 мин в метаноле (метиловом спирте), снова высушивают на воздухе. Фиксированные мазки можно хранить до окраски несколько дней.
Окраска мазка. Стекла укладывают мазками кверху на стеклянные палочки в фотокювете. На всю поверхность мазка наливают разведенную в фосфатном буфере (рН 6,9—7,1) краску Романовского на 30—50 мин. Продолжительность окраски зависит от температуры помещения — в теплом она меньше, в холодном — больше. После окраски препарат ополаскивают дистиллированной водой (или кипяченой) и высушивают. Исследуют под иммерсией.
Оценка результатов. В разгаре болезни лейшмании могут обнаруживаться легко. В ранней стадии и в период лечения требуется более длительный просмотр мазка — не менее 40 мин.
В препаратах лейшманий могут находиться группами или поодиночке, как внутриклеточно, так и вне клеток в связи с разрушением их во время приготовления мазка.
При кожном лейшманиозе исследуют мазки из не распавшихся бугорков или из инфильтратов вблизи язв.
Пункция кожных поражений и лимфатических узлов.
При некоторых болезнях протозойной этиологии, например, кожном лейшманиозе, исследуют материал из кожных поражений, а в ряде случаев исследуют пунктат лимфатических узлов (лейшманиоз, трипаносомоз, токсоплазмоз).
При кожном лейшманиозе мазки готовят из не распавшихся бугорков и язв. Кожу в области бугорка протирают спиртом, двумя пальцами слегка сдавливают и иглой или кончиком скальпеля делают прокол или поверхностный надрез. Из выступившей серозно-кровянистой жидкости готовят на предметном стекле мазок.
При наличии язв материал брать непосредственно из них не рекомендуется, так как наличие микрофлоры и остатков разрушенных клеток затрудняет поиски лейшманий. Поэтому после предварительной обработки кожи спиртом область вокруг язвы сжимают двумя пальцами и в зоне инфильтрата по краю язвы делают прокол иглой или поверхностный разрез скальпелем. Для приготовления мазков используют каплю серозно-кровянистой жидкости или полученный при поскабливании скальпелем по краю разреза материал.
Мазки сушат на воздухе, фиксируют смесью Никифорова и красят по Романовскому.
Оценка результатов. В препарате должны быть хорошо различимы клетки инфильтрата — макрофаги, эндотелиальные, плазматические, лимфоидные клетки, фибробласты и небольшая примесь клеток периферической крови. Наличие в препарате эпителиальных клеток, бесструктурных глыбок, окрашивающихся в равномерно сиреневый цвет, означает, что соскоб был взят поверхностно и должен быть повторен. В мазке не должно быть слишком много крови, а также гноя и бактерий.
Лейшмании обнаруживаются в макрофагах, а также вне клеток в виде округлых, овальных или удлиненных телец размером 3—5 мкм.
Лейшмании легко обнаруживаются на начальных стадиях изъязвления. В гнойном отделяемом язвы могут быть обнаружены лишь деформированные и разрушающиеся лейшмании, по которым трудно поставить диагноз. На стадии заживления обнаруживаются редко.
Пункция увеличенных лимфатических узлов обычно проводится врачом с помощью инъекционной иглы после соответствующей обработки кожи. Узел придерживают рукой, содержимое через иглу насасывают шприцем и наносят на предметное стекло.
В ряде случаев применяют метод посева крови больного или материала из кожных поражений или костного мозга на среду, которая готовится из агара с добавлением дефибринированной крови кролика. В положительном случае на 2— 10-й день в культуре появляются жгутиковые формы лейшманий.
Профилактика.
Профилактические мероприятия выбираются применительно к виду лейшманиоза. При лейшманиозе проводят подворные обходы для раннего выявления больных, организуют систематическое уничтожение безнадзорных собак и осмотры зарегистрированных собак ценных пород (охотничьи, сторожевые, служебные и т.д.). При антропонозной форме кожного лейшманиоза основным профилактическим мероприятием является выявление и лечение больных людей. При зоонозной форме организуют истребление диких грызунов.
Надежным средством индивидуальной профилактики являются прививки живой культуры жгутиковых форм. Важным разделом борьбы против всех видов лейшманиоза служит уничтожение москитов и предохранение людей от их укусов.
Трипаносомы
Строение.
Для человека патогенны три вида из рода Trypanosoma , причем два вида вызывают африканский трипаносомоз (сонную болезнь) и один вид —американский трип аносомоз (болезнь Шагаса).
Тело трипаносом продолговатое, узкое, имеет жгутики и ундулирующую мембрану. Длина тела 17—28 мкм. Переносчиком возбудителей африканского трипаносомоза являются мухи рода Glossina, или це-це (рис.№ 7 и 8 ).
Рис. № 7 Жизненный цикл Trypanosoma rhodesiense
Рис № 8 Жизненный цикл Tripanosoma gambiense
Болезнь Шагаса переносится триатомовыми клопами (рис. 9).
Рис № Жизненный цикл Trypanosoma cruzi
Клиника.
При нападении на человека зараженного переносчика трипаносомы проникают в кровь, затем — во внутренние органы и центральную нервную систему, где и размножаются. У больных повышается температура тела, появляется сыпь на теле, увеличиваются лимфатические узлы.
При сонной болезни поражается центральная нервная система, развивается менингоэнцефалит, обычно приводящий больного к гибели по истечении нескольких месяцев или лет.
Болезнь Шагаса — тяжелое заболевание, поражающее внутренние органы, сердечную мышцу, головной мозг. В СНГ могут выявляться только завозные случаи трипаносомозов.
Диагностика.
При африканском трипаносомозе паразитологическое исследование имеет свои особенности, зависящие от стадии заболевания. Возбудителя можно обнаружить в начальном периоде заболевания на месте укуса зараженной мухой це-це, а также в периферической крови. В поздний период лихорадки или по окончании его трипаносом обнаруживают в пунктате увеличенных лимфатических узлов. В период проявления симптомов поражения центральной нервной системы паразитов, в крови и в лимфатических узлах нет. На этой стадии болезни более эффективно исследование спинномозговой жидкости.
Для обнаружения трипаносом исследуют свежие или окрашенные препараты. В первом случае каплю крови, смешанную с цитратом, пунктат лимфатического узла или спинномозговой жидкости помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Подвижных трипаносом можно заметить даже при малом увеличении микроскопа, хотя лучше их видно при большом увеличении. Более распространенным является исследование постоянных окрашенных по Романовскому препаратов, для чего готовят мазки и толстые капли обычным способом. В окрашенных препаратах трипаносомы легко распознаются среди клеточных элементов. При окраске по Романовскому тело трипаносом окрашивается в голубоватый цвет, ядро и жгуты— в красный. На препарате можно видеть мембрану, соединяющую волнообразно извитой жгутик с краем тела.
Если в свежих или окрашенных препаратах не удается обнаружить возбудителя, используют метод заражения лабораторных животных. Наиболее чувствительны к заражению трипаносомами белые мыши, у которых после введения исследуемого материала подкожно или внутримышечно уже на 2—3-й день в крови появляются паразиты.
При американском трипаносомозе возбудитель обнаруживается в острой стадии болезни в периферической крови в свежих или окрашенных по Романовскому препаратах. Однако по сравнению с африканской формой болезни число трипаносом здесь значительно меньше, поэтому требуется просматривать большое число препаратов. В хронической стадии паразиты в крови встречаются очень редко, поэтому исследование периферической крови бывает малоэффективным. В таких случаях рекомендуется заражение белых мышей или морских свинок, а также посевы на питательные среды. С целью диагностики используют серологические реакции: связывания комплемента, агглютинации, флюоресцирующих антител.
Лямблии
Строение.
Лямблия (Lamblia intestinalis) впервые была описана русским ученым Д. Ф. Лямблем (1859), в честь которого она и получила свое название.
Лямблия существует в виде вегетативной формы (трофозоит) и цисты (рис. 10).
Вегетативная форма активная, подвижная, грушевидная, передний конец тела закруглен, задний заострен. Длина 9—18 мкм. В передней части тела находится присасывательный диск в виде углубления. Имеет 2 ядра, 4 пары жгутиков. Жгутики, проходя частично в цитоплазме, образуют два хорошо видимых при окраске продольных пучка.