Серебра нитрат, хч ГОСТ 1277-81
2-Феноксиметанол, ч ТУ 6-09-3688-76
Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)
с 5% SE-30, Хемапол, Чехия
Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 1,5
ОV-17 + 1,95% QF-1, Хемапол, Чехия
Пластинки для ВЭТСХ (СССР)
Пластинки "Кизельгель 60 F-254" (ФРГ)
Пластинки "Силуфол" Чехия
Бумажные фильтры "белая лента", обеззоленные и предварительно промытые гексаном ТУ 6-09-2678-77
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Жидкостный хроматограф Милихром
с ультрафиолетовым детектором
Хроматографическая колонка стальная,
длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм,
заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм
Хроматограф газовый серии "Цвет" или
аналогичный, снабженный детектором постоянной
скорости рекомбинации (ДПР) с пределом
детектирования по линдану 4 x 10 г/куб. см
Хроматографическая колонка стеклянная, длиной
1 или 2 м, внутренним диаметром 2 - 3 мм
Микрошприц типа МШ-10, вместимостью 10 мкл ТУ 5Е2-833-024
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Баня водяная ТУ 64-1-2850-76
Весы аналитические типа ВЛА-200 ГОСТ 34104-80Е
Камера хроматографическая ГОСТ 10565-74
Насос водоструйный ГОСТ 10696-75
Облучатель ртутно-кварцевый типа ОКН-11 ТУ 64-1-1618-77
Пульверизаторы стеклянные ГОСТ 10391-74
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М
или аналогичный ТУ 25-11-917-76
Установка компрессорная ТУ 64-1-2985-78
Шкаф сушильный ТУ 64-1-1411-76Е
Воронки делительные ГОСТ 3613-75
Колбы мерные, вместимостью 100 мл ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные, вместимостью 10, 50 мл ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом,
вместимостью 100 мл ГОСТ 10394-72
Колбы конические, вместимостью 100 мл ГОСТ 22524-77
Пробирки центрифужные, мерные ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 0,1, 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74
Воронки химические, конусные, диаметром
34 - 40 мм ГОСТ 25336-82Е
2.4. Отбор проб
Отбор, хранение и подготовка проб проводятся в соответствии с
"Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными за N 2051-79 от 21.08.79
Отобранные пробы можно хранить в холодильнике не более 5 дней. Перед анализом воду (при наличии взвеси) фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Метод ВЭЖХ
2.5.1.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают с помощью пипетки 5 мл изопопанола и 5 мл метанола, доливают до метки гексаном, перемешивают, фильтруют.
2.5.1.2. Кондиционирование колонки
Промыть колонку для ВЭЖХ смесью гексан-метанол-изопропанол (90:5:5, по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин.
2.5.2. Метод ГЖХ. Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (5% SE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 -С в течение 10 -12 ч.
2.5.3. Метод ТСХ
2.5.3.1. Приготовление проявляющих реагентов
2.5.3.1.1. Проявляющий реагент N 1
1 г нитрата серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиметанола, 190 мл ацетона, 1 - 2 капли пероксида водорода, раствор перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
2.5.3.2.2. Проявляющий реагент N 2
0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, добавляют 10 мл 25%-ного водного аммиака, раствор доводят до 100 мл ацетоном, перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
2.5.3.2. Приготовление подвижной фазы для ТСХ
В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 мл ацетона и добавляют до метки гексан, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6 - 8 мм за 30 мин. До начала хроматографирования.
2.5.4. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор кломазона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д. в., в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0; 10,0; 20 и 40,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора кломазона соответствующим последовательным разбавлением гексаном.
Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.
2.5.5. Построение градуировочного графика
2.5.5.1. Градуировочный график А (измерение по п. 2.7.1, ВЭЖХ)
Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 4,0; 10,0; 20,0 и 40 мкг/мл.
2.5.5.2. Градуировочный график В (измерение по п. 2.7.2, ГЖХ)
Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0.
Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или В) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации кломазона в растворе в мкг/мл.
2.6. Описание определения
100 мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 10 мл 25%-ного водного раствора гидроксида натрия, перемешивают и добавляют 20 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 3 мин., после разделения фаз гексановый слой сливают в грушевидную колбу вместимостью 100 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в конической воронке на складчатом бумажном фильтре. Извлечение препарата из водной пробы повторяют еще дважды, используя по 20 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 -С почти досуха, остаток отдувают потоком воздуха или азота особой чистоты. Сухой остаток растворяют в 0,1 (ВЭЖХ, ТСХ) или 0,25 мл (ГЖХ) н- гексана и анализируют одним из хроматографических методов.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. ВЭЖХ
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия).
Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм,
заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: гексан-изопропанол-метанол (90:5:5, по объему).
Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.
Рабочая длина волны: 240 нм.
Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 мкл.
Время выхода кломазона: около 6 мин.
Линейный диапазон детектирования: 20 - 200 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 40 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
2.7.2. ГЖХ
Хроматограф газовый "Цвет-570" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.
Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматоном N-AW-DMCS с 5% SE-30 (0,16 - 0,20 мм).
Рабочая шкала электрометра 64 x 10 10Ом.
Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
Температура термостата колонки - 190 -С
детектора - 300 -С
испарителя - 220 -С
Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.
Объем вводимой пробы - 5 мкл.
Время выхода кломазона - 2,5 мин.
Линейный диапазон детектирования: 2 - 50 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют гексаном.
Для повышения точности идентификации кломазона при совместном присутствии в пробе гамма-ГХЦГ, имеющего близкое время удерживания, кломазон удаляется из пробы обработкой концентрированной серной кислотой. Повторный анализ пробы позволяет установить вклад кломазона в первичный хроматографический сигнал.
2.7.3. ТСХ
Гексановый раствор в колбе, полученный по п. 2.6 количественно
(или его аликвотную часть) наносят на хроматографические пластинки "Силуфол", "Кизельгель 60F-254" или "Пластинки для ВЭТСХ". Рядом наносят стандартные растворы в объеме, соответствующем содержанию кломазона 1, 2, 5 и 10 мкг. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-гексан-ацетон (4:1, по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу до испарения растворителей, затем обрабатывают одним из проявляющих реагентов и помещают под ультрафиолетовую лампу на 5 мин. Зона локализации препарата на пластинках "Силуфол", "Пластинках для ВЭТСХ" и "Кизельгель 60F- 254" проявляется в виде серо-бурых пятен с величиной Rf 0,35, 0,85 и 0,43, соответственно. Для определения кломазона методом ТСХ можно использовать пластинки "Алюграм" и "Полиграм" (производства ФРГ). Величина Rf кломазона на этих пластинках составляет 0,37 и 0,38, соответственно.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
5. Разработчики
Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).
Давидюк Е.И. (УкрНИИГИНТОКС, г. Киев); Кисенко М.А., Демченко В.Ф. (Институт медицины труда АН и АМН Украины, г. Киев).