Тонкослойная хроматография и ее роль в контроле качества пищевых продуктов (стр. 7 из 9)

где X — содержание препарата в пробе, мг/кг или мг/л; А — количество препарата, найденное путем визуального сравнения со стандартным раствором, мкг; Р — масса или объем исследуемой пробы, г или мл; А₁ – содержание препарата в стандартном растворе, мкг; S₁ – площадь пятна стандартного раствора, мм²; S – площадь пятна пробы, мм².

Величина R_f зависит от адсорбента, размера его частиц, количества и природы связующего материала, толщины слоя, природы подвижного растворителя, степени насыщения камеры для хроматографирования парами подвижного растворителя, расстояния пройденного растворителем, температуры, количества и природы коэкстрактивных веществ.

Для ДДТ R_f для оксида алюминия составляет 0,61-0,71 (в зависимости от изомера) и 0,50-0,54 на силикагеле.

На слое оксида алюминия обнаруживаются три пятна, которые соответствуют 4,4'-ДДТ (основное пятно), 2,4'-ДДТ и 4,4'-ДДД (слабое пятно). Пятно ДДД проявляется, если содержание ДДТ в анализируемой пробе превышает 20 мкг. Содержание изомеров ДДТ суммируют. На хроматограммах проб пищевых продуктов, содержащих остаточные количества ДДТ, кроме упомянутых трех пятен, обнаруживается четвертое пятно, соответствующее продукту разложения ДДТ — ДДЭ.

На слое силикагеля технический препарат ДДТ дает одно пятно, соответствующее сумме изомеров. Если количество ДДТ в пробе превышает 20 мкг, на хроматограмме появляется слабое пятно, соответствующее ДДД. [5]

2.2 Определение о,о-диэтил-8-(6-хлорбензоксазолинил-3-метил)-дитиофосфата (фозалона) в яблоках методом тонкослойной хроматографии

Фозалон применяется для борьбы с вредителями сада. [6]

В литературе описана идентификация фозалона и определение его в растениях колориметрическим и биологическим методами [7].

Однако эти методы весьма громоздки, так как требуют сложной очистки растительных экстрактов. Нами был разработан простой качественный и количественный метод определения остаточных количеств фозалона в яблоках с применением тонкослойной хроматографии. Исходным веществом служил чистый препарат фозалона. Опыты проводили с яблоками сорта Ренет Симиренко.

После испытания ряда экстрагентов для извлечения фозалона из яблок был избран хлороформ. Для идентификации фозалона применили метод тонкослойной хроматографии.

При подборе подвижной фазы был изучен ряд органических растворителей и их смесей. Наилучшей для идентификации фозалона является смесь гексана с ацетоном в соотношении 4:1.

Для проявления фозалона на хроматографических пластинках был испытан ряд реактивов, рекомендованных для проявления фосфорорганических пестицидов [8 – 11].

Наилучшие результаты дали 0,2%-ный раствор хлористого палладия [L. Fishbein, J. Fowkes, P. Jones. J. Chromatogr., 23, 47b (1966).] или смесь 0,05 %-ного раствора бром-фенолового синего в ацетоне с 1%-ным водным раствором AgNО₃ в соотношении 1:1, с последующим отбеливанием хроматограмм 2,5%-ным раствором лимонной кислоты [Л. М. Фукельман. Сборник трудов ВИЗР, вып. 20, ч. 4, 61 (1964).]. Эти проявители позволяют обнаруживать до 1 мкг фозалона.

Рис. 5. Тонкослойная хроматограмма фозалона1 из экстракта яблок на силикагеле КСК. а – место нанесения экстракта; б – точка нанесения стандарта; в – место отложения фозалона

Рис. 6. Двухмерная тонкослойная хроматограмма фозалона из экстракта яблок на силикагеле КСК. а — б — место нанесения экстракта с содержанием фозалона 50 мкг; в, г, д – точки нанесения стандартных растворов фозалона, соответственно 25, 50 и 75 мкг.

Предлагаемая методика определения фозалона в яблоках заключается в следующем. 100 г яблок измельчают, наносят пипеткой определенное количество фозалона. Экстрагируют хлороформом при встряхивании на шутель-аппарате 1,5 часа. Хлороформный экстракт отделяют от растительной массы фильтрованием. Растительную массу на фильтре промывают трижды хлороформом (по 20 мл). Фильтрат и промывные порции хлороформа собирают в колбу для отгонки растворителя. Хлороформ отгоняют под вакуумом до объема 5—10 мл. Переносят его количественно в стаканчик, упаривают до 0,5 мл и наносят на пластинку полоской шириной 1 см длиной 5 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края пластинки.

Для хроматографирования используют стеклянные пластинки размером 9 X 15 см, на которые наносят тонкий слой силикагеля марки КСК (40 меш), закрепленный гипсом.

Хроматографирование проводят в системе гексан — ацетон (4:1).

Пластинки проявляют указанными выше проявителями. Причем в случае применения хлористого палладия пятна фозалона окрашиваются в желтый цвет на белом фоне, а примеси —.в коричневый. Окраска не исчезает в течение длительного промежутка времени. При применении второго проявителя пятна фозалона окрашиваются в синий цвет на желтом фоне, а примеси совсем не окрашиваются. Следует отметить, что в этом случае пятна фозалона через 10—15 мин. бледнеют. R_f фозалона равно 0,5 (рис. 5).

Чувствительность метода 0,1 мг/кг.

Этот вариант метода позволяет качественно определять содержание фозалона в растительной пробе.

Для количественного определения фозалона в пробе мы использовали двухмерную хроматографию на пластинках размером 15 ´ 20 см.

Экстракцию и отгонку проводят так же, как и в предыдущем случае. Экстракт без очистки наносят на пластинку полоской длиной 5 см и шириной 1 см на расстоянии 1,5 см от нижнего края (нижняя сторона пластинки 15 см) и 2 см от левого края пластинки.

Хроматографирование проводят в подвижном растворителе гексан — ацетон (4 : 1). Дают растворителю продвинуться на 12—15 см, потом пластинку высушивают на воздухе в течение 20 мин. Далее поворачивают ее на 90^е так, чтобы левый край пластинки служил основанием. С левой стороны пластинки наносят стандарты с разным содержанием фозалона и хроматографируют в том же подвижном растворителе. С целью получения хорошо сформированных пятен проводят повторное хроматографирование в том же направлении, но с применением другого подвижного растворителя — хлороформа.

После проявления пластинок теми же реактивами, что и в предыдущем случае, получали пятна с R_f = 0,82 (рис. 6). Количественное определение фозалона проводят сравнением пятна анализируемой пробы с пятнами стандартов.

Предложенным методом было проведено определение остатков фозалона в яблоках (см. таблицу).

Определение фозалона в 100 г яблок

Внесено фозалона, мкг	Найдено фозалона, мкг	Ошибка		Внесено фозалона, мкг	Найдено фозалона, мкг	Ошибка
		мкг	%			мкг	%
25	20	5	- 20	75	70	5	- 6,7
50	45	5	-10	100	85	15	- 15
50	40	10	- 20

Глава 3. ТСХ – оборудование

3.1 Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ для инструментальной ТСХ

Оборудование фирмы НТЦ ЛЕНХРОМ позволяет провести все рабочие этапы современной тонкослойной хроматографии:

- дозировка и нанесение проб

- проведение процесса хроматографии

- УФ-обнаружение

- детектирование (окрашивание) хроматограмм

- видеозапись изображений пластинок

- количественная обработка хроматограмм

Объекты исследования и области применения планарной хроматографии

1. Готовые лекарственные формы

- подлинность действующих веществ

- точность дозировки

- наличие вредных примесей и добавок

2. Фармакология

- фармакокинетические исследования

- изучение метаболизма действующих веществ

3. Биохимия и медицина

- определение содержания важнейших биологически активных соединений в жидкостях и тканях организма

- изменение содержания этих веществ при патологии

- судмедэкспертиза

- допинг-контроль

4. Охрана окружающей среды

- анализ пестицидов в питьевой и сточных водах, осадках, продуктах питания

- анализ токсических веществ (например, афлатоксинов) в продуктах питания

3.1.1 Портативный набор для тсх

Портативный набор для ТСХКомплект предназначен для качественного и полуколичественного анализов многокомпонентных смесей органических и неорганических веществ и может найти применение во всех областях науки и техники, где для анализа используется метод тонкослойной хроматографии.Комплект позволяет:

- проводить анализ смесей методом ТСХ, основанном на разделении анализируемых веществ за счет различной скорости перемещения их по тонкому слою сорбента, нанесенного на плоскую подложку (стеклянную, полимерную или алюминиевую);

- наносить точное количество анализируемых веществ на хроматографические пластины;

- анализировать одновременно большое количество проб;

- обнаруживать и просматривать хроматограммы в ультрафиолетовом свете;

- окрашивать хроматограммы;

- удалять органические растворители с хроматограмм высушивающим устройством с подогревом.

Комплект включает:

- Ультрафиолетовый осветитель УФО-254

- Хроматографическую камеру для пластин размером 130-130-56 см

- Пластины для ТСХ (10х10), одна упаковка - 50 шт

- Пульверизатор для вязких и агрессивных жидкостей

- Пульверизатор для маловязких и неагрессивных жидкостей

- Фен

Торрированные стеклянные капилляры V=1 ml

3.1.2 Базовый набор для ТСХ

Базовый набор для ТСХ (расширенный)

- УФ-кабинет 254/365 (ультрафиолетовая лампа) - 1 шт.

- Спрей-камера коррозионностойкая (камера для окрашивания хроматограмм методом опрыскивания) - 1 шт.