4. Методы выделения ферментов
Классические методы. Экстрагирование ферментов из биологического материала. Кислотная обработка, термическая обработка, фракционирование солями, органическими растворителями, ионообменная хроматография, гельфильтрация, электрофорез. Аффинная хроматография, носители и лиганды. Комбинирование различных методов для очистки ферментов. Критерии чистоты ферментных препаратов.
Иммобилизованные ферменты. Методы получения. Изучение свойств иммобилизованных ферментов.
5. Кинетические параметры и физико-химические свойства очищенных форм ферментов
Кинетика ферментативного катализа. Методика определения максимальной скорости ферментативной реакции. Определение константы Михаэлиса. Различные способы графического определения константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции. Влияние концентрации фермента на скорость ферментативной реакции. Влияние концентрации субстрата. Влияние температуры и рН среды на скорость ферментативных реакций. Ингибиторы ферментов и их классификация. Конкурентное, неконкурентное, бесконкурентное, смешанное ингибирование. Способы определения типа и константы ингибирования.
Специфичность действия ферментов. Основные типы специфичности. Проявление специфичности на примере различных ферментов.
Список основной литературы
1. Кретович В.Л. Введение в энзимологию. – М.: Наука, 1986. – 332 с.
2. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. – М.: Мир, 1982. – Т. 1 – 3.
3. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. – М.: Мир, 1980. – 432 с.
4. Фридрих П. Ферменты: четвертичная структура и надмолекулярные комплексы. – М.: Мир, 1986. – 374 с.
5. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. – М.: Высш. школа, 1980. – 272 с.
6. Практикум по биохимии/ под ред. С.Е. Северина и Г.А. Соловьёвой. – М.: МГУ, 1989. – 509 с.
Список дополнительной литературы
1. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. – М.: Наука, 1978. – 248 с.
2. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. – М.: Мир, 1979. – 280 с.
3. Тривен М. Иммобилизованные ферменты. – М.: Мир, 1983. – 293 с.
4. Бернхард С. Структура и функция ферментов. – М.: Мир, 1971. – 334 с.
Требования к уровню освоения программы
В результате изучения данной дисциплины студент должен
знать классификацию и номенклатуру ферментов, их строение и механизмы функционирования, а также современные методы работы с ферментами.
уметь применять приемы номенклатуры ферментов, давать характеристику важнейшим из них.
владеть приемами и навыками работы с ферментами.
Перечень вопросов к зачету
Способы количественного выражения ферментативной активности. Общая активность, удельная активность, молекулярная активность, активность каталитического центра.
Современные методы: химические, электрохимические, фотометрические, спектрофотометрические, флюориметрические.
Органная специфичность распределения ферментов. Изучение органного распределения ферментов.
Специфичность распределения ферментов в тканях: нервной ткани, мышцах, печени, соединительной ткани (крови), пищеварительной системе. Цитология ферментов.
Методика фракционирования ткани по субклеточным структурам. Изучение субклеточной локализации ферментов.
Определение ферментов-маркеров лизосом, митохондрий, пероксисом, ядра, микросомальной фракции.
Кинетика ферментативного катализа.
Методика определения максимальной скорости ферментативной реакции.
Определение константы Михаэлиса.
Различные способы графического определения константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции.
Влияние концентрации фермента на скорость ферментативной реакции. Влияние концентрации субстрата.
Влияние температуры и рН среды на скорость ферментативных реакций. Ингибиторы ферментов и их классификация.
Способы определения типа и константы ингибирования.
Специфичность действия ферментов.
Основные типы специфичности.
Проявление специфичности на примере различных ферментов. Экстрагирование ферментов из биологического материала.
Комбинирование различных методов для очистки ферментов.
Критерии чистоты ферментных препаратов.
Иммобилизованные ферменты. Методы получения. Изучение свойств иммобилизованных ферментов.
Сведения о переутверждении программы на очередной учебный год и регистрации изменений
| Учебный год | Решение кафедры | Внесенные изменения | Номера листов (страниц) | ||
| заменен-ных | новых | аннули-рованных | |||
| 20__/20__ | Протокол № ____ от «__» __________ 20__г. Зав. кафедрой ______________ | ||||
| 20__/20__ | Протокол № ____ от «__» __________ 20__г. Зав. кафедрой ______________ | ||||
Программу составил:
1. Соловьев В.Б., канд. биол. наук, доцент ____________________________
(подпись)
Настоящая программа не может быть воспроизведена ни в какой форме без предварительного письменного разрешения кафедры-разработчика программы.
Программа одобрена на заседании кафедры биохимии
Протокол № от «__» __________ 200__года
Зав. кафедрой биохимии
д.б.н., профессор Генгин М.Т. ___________________________________________
(подпись)
Программа одобрена учебно-методическим советом Естественно-географического факультета
«_____» _____________ 2007 года
Председатель учебно-методического совета
Естественно-географического факультета,
к.т.н., доцент ___________________________ О.В. Зорькина
(подпись)
Программа одобрена учебно-методическим управлением университета
«_____» _____________ 2007 года
Начальник учебно-методического
управления университета ___________________________ Г.Н. Шалаева
(подпись)
ЛИСТ РЕГИСТРАЦИИ ИЗМЕНЕНИЙ
| Изменение | Номера листов (стр.) | Всего листов в док. | Номера распорядит. документа | Подпись | Дата | Срок введения изменений | ||
| замен. | новых | аннул. | ||||||