Весь процесс твердофазной экстракции состоит в большинстве случаев из 4 последовательных стадий. Для получения максимального выхода и чистоты экстракта необходимо оптимизировать каждую стадию.
1. Кондиционирование сорбента
При работе с химически модифицированными сорбентами требуется их предварительная активация органическим растворителем (ацетонитрилом или метанолом). За активацией следует процедура уравновешивания активированного сорбента водой или буферным раствором для более эффективного нанесения пробы. Данная стадия является критичной для воспроизводимой сорбции анализируемого компонента.
2. Нанесение образца
Раствор образца пропускается (под действием вакуума или давления) через предварительно активированный и уравновешенный картридж для ТФЭ. В процессе этого анализируемый компонент концентрируется в виде узкой зоны в слое сорбента. В идеальном случае все побочные компоненты матрицы не удерживаются на сорбенте и проскакивают в сливную ёмкость.
3. Промывка
Оставшиеся на сорбенте после нанесения пробы нежелательные компоненты матрицы удаляются с поверхности неподвижной фазы небольшим объёмом воды или буферного раствора. Также допускается использование буферного раствора или воды с небольшой добавкой подходящего органического растворителя.
4. Элюирование целевого компонента
В результате этой последней стадии твердофазной экстракции анализируемое вещество десорбируется подходящим растворителем и смывается в виде узкой зоны с последующим концентрированием или разбавлением полученного экстракта и его анализом. Необходим подбор растворителя, наиболее эффективно разрывающего взаимодействие целевого вещества с сорбентом.
Таким образом для разработки оптимального метода подготовки пробы с помощью твердофазной экстракции необходимы исчерпывающие знания химических и физико-химических свойств анализируемого вещества
Инструкция по выбору картриджей LiChrolut®
Приведённая ниже таблица содержит более детальную информацию по очистке и концентрированию полярных, неполярных и ионогенных соединений.
| тип колонки LiChrolut® | матрица образца | целевые вещества | элюирующий растворитель | |
| Неполярная экстракция | RP-18 RP-18e(эндкэппинг) CN | Водный буферный раствор | Ароматические системы колец, соединения с алкильными группами | Ацетонитрил, метанол, этилацетат |
| Полярная экстракция | Si CN NH2 | Гексан, масла, хлорпроизводные углеводородов | Гидроксильные группы, амины, соединения с гетероатомами (S, N, O) | Метанол, 2-пропанол |
| Катионный обмен | SCX (сильный) | Метанольный/водный буферный раствор с низкой ионной силой; значение рН должно быть на 2 единицы ниже значения рК целевого вешества | Катионы: амины, пиримидины | Водный буферный раствор с большой ионной силой (0.1М); значение рН должно быть на 2 единицы выше значения оК целевого вещества |
| Экстракция смешанного типа | TSC | Биологические жидкости | Катионогенные и нейтральные вещества | Хлороформ-ацетон, NH3-этилацетат либо NНЗ-метанол |
| Анионообменная экстракция | SAX (сильный) NH2(слабый) | Метанольный/водный буферный раствор с низкой ионной силой; значение рН должно быть на 2 единицы выше значения рК целевого вещества | Анионогенные вещества: кар-боновые кислоты, сульфоновые кислоты, фосфаты | Водный буферный раствор с большой ионной силой (0.1М); значение рН должно быть на 2 единицы ниже значения рК целевого вешества |
| Неполярная экстракция на полимерном сорбенте | EN | Питьевые, грунтовые и поверхностные воды | Полярные контаминанты: пестициды, фенолы, взрывчатые вещества, анилины | Этилацетат, метанол, ацетонитрил: метанол (1:1) |
| Неполярная экстракция на полимерном сорбенте | EN | Биологические жидкости | Лекарственные средства | Ацетонитрил, метанол |
| Полярная экстракция загрязняющих экологию веществ | Florisil | Сточные/грунтовые/питьевые воды, образцы почвы | Гербициды, пестициды, ПХБ, ПХФ, диоксины, фенолы, нитросоединения | Гексан, дихлорметан |
LiChrospher® ADS для прямой "ин-лайн" подготовки проб биологических жидкостей
Подготовка пробы с помощью интегрированного в хроматографическую систему картриджа LiChrospher® ADS является более дешёвым, быстрым и точным аналогом традиционной подготовки пробы.
LiChrospher® ADS позволяет осуществлять прямую экстракцию и концентрирование гидрофобных низкомолекулярных соединений из необработанных проб, таких как кровь, плазма, сыворотка, молоко, бражка, супернатанты клеточных культур и тканей, а также грубые экстракты продуктов питания. LiChrospher® ADS позволяет полностью автоматизировать процесс подготовки пробы перед её разделением на хроматографической колонке. Благодаря этому существует возможность прямого ввода необработанных проб биологических жидкостей в хроматографическую систему без угрозы для колонки и качества полученных аналитических результатов.тСорбенты LiChrospher® ADS принадлежат к семейству так называемых материалов с ограниченным доступом (RAM, restrictedaccessmaterials) с двумя отличающимися по химической природе поверхностями. В основе экстракции или фракционирования на сорбентах LiChrospher® ADS лежат два хроматографических механизма: обращённо-фазовый/ион-парный и сайз эксклюзионный. Существует три типа предколонок ADS, различающихся по гидрофобности, силе удерживания и экстрактивным свойствам по отношению к неполярным соединениям:
LiChrospher® RP-4 ADS, LiChrospher® RP-8 ADS и LiChrospher® RP-18 ADS
Характеристики сорбента LiChrospher® ADS
| Характеристика сорбента: | Сферический силикагель со смешанными химически модифицированными поверхностями: 1. Внешняя поверхность: модифицирована диольными группами 2. Внутренняя поверхность (поверхность пор): модифицирована С-4, С-8, или С-18 лигандами ADS = Alkvl-DIQL-Silica |
| Размер частиц: | 25 µ |
| Диаметр пор: | 60 А (6нм) |
Информация для заказа картриджей LiChrospher® ADS
| Тип сорбента | Каталожный номер | Размер частиц | Размеры Длина | Размеры вн.диам. | Количество в упаковке |
| Набор для картриджа LiChrospher® RP-4 ADS | 1.50206.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-4 ADS 1 держатель manu-CART® 25-4 |
| LiChrospher® RP-4 ADS | 1.50208.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 3 штуки |
| Набор для картриджа LiChrospher® RP-8 ADS | 1.50207.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-8 ADS 1 держатель manu-CART® 25-4 |
| LiChrospher® RP-8 ADS | 1.50209.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 3 штуки |
| Набор для картриджа LiChrospher® RP-18 ADS | 1.50187.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-18 ADS 1 держатель manu-CART® 25-4 |
| LiChrospher® RP-18 ADS | 1.50947.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 3 штуки |
| Набор для картриджа LiChrospher® ADS | 1.50210.0001 | 25µ | 25мм | 4мм | 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-4 ADS 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-8 ADS 1 LiChroCART® 25-4 LiChrospher® RP-18 ADS 1 держатель manu-CART® 25-4 |
| Держатель ин-лайн фильтра | 1.51193.0001 | 1 штука | |||
| LiChrospher® ADS Ин-лайн фильтр (запасной набор) | 1.51192.0001 | 5 штук |
Описание картриджей LiChrospher® ADS
Анализ биологических жидкостей
| Задача: | ВЭЖХ анализ низкомолекулярных соединений (лекарственных средств и их метаболитов) в биологических образцах (крови, плазме, сыворотке, молоке, клеточных культурах или тканях) удаление необратимо сорбирующихся или выпадающих в осадок макромолекулярных структур (например, белков) перед вэжх анализом. |
| Негативные явления: | необратимое увеличение обратного давления уменьшение ёмкости сорбента падение селективности разделения серьёзный ущерб ВЭЖХ колонке |
| Решение: LiChrospher® ADS: | специально разработанный картридж в виде предколонки для интегрирования в хромтаографическую систему внешняя поверхность частиц сорбента не удерживает компоненты матрицы благодаря своей электронейтральной или гидрофильной природе внутренняя поверхность пор доступна только для низкомолекулярных веществ (MW < 15000 дальтон), а удерживание (экстракция, концентрирование) происходит по классическому обращённо-фазовому распределению Экстракцию и концентрирование можно оптимизировать варьированием типа картриджа LiChrospher® ADS: С-18, С-8 или С-4 |
Принцип работы
1. Ввод пробы и фракционирование
Ввод пробы осуществляется непосредственно в предколонку. В идеальном случае сорбент предколонки удерживает (экстрагирует и концентрирует) только целевые вещества, тогда как остальные компоненты пробы (матрица) проскакивают мимо с потоком элюента, создаваемым насосом 1.