Для получения 1 литра концентрированной питательной среды необходимо:
Сделать навески: однозамещенного фосфорно-кислого калия – 1 г, лимоннокислого натрия – 1 г, сернокислого магния – 1 г, натрия пировинограднокислого (гликокола) – 4 г и каждую навеску поместить в стерильную фарфоровую ступку.
Обеззаразить навески путем смачивания каждой навески 1 мл 70º этилового спирта. Затем поместить ступки с навесками в термостат при температуре 370С и высушить при периодическом помешивании в течение 45 минут.
Приготовить 1 литр желточной массы. 50 штук куриных яиц обработать снаружи с целью обеззараживания 70о спиртом. Затем отделить белок от желтка. Перенести желточную массу в мерную колбу и тщательно гомогенизировать.
Приготовить желточно-солевую смесь. К 1 литру желточной массы (по п.3) добавить обеззараженные навески (по п.2) и перемешать.
Приготовить раствор бактерицидного красителя. Навеску 700 мг малахитовой зелени смочить 1 мл 70о спирта и соединить с 70 мл глицерина (это соответствует 1% раствору малахитового зеленого в глицерине).
Получение концентрированной питательной смеси. Производят соединение 1 л желточно-солевой смеси с 70 мл 1% раствора малахитового зеленого в глицерине (по п.5) и тщательно гомогенизируют. Полученную концентрированную питательную смесь (среду) выдерживают в течение суток при комнатной температуре и разливают среду во флаконы емкостью 250 мл, которые герметично упаковывают и маркируют. Укупоренные флаконы с концентрированной питательной средой хранят в холодильнике при 3-5ºС в течение 3-4 недель. Приготовление рабочей (используемой при тестировании дезсредств) плотной питательной среды в пробирках. К концентрированной питательной среде добавляют равный объем стерильной дистиллированной воды (1:1), гомогенизируют, разливают по 5 мл в пробирки. Для образования скоса питательной среды пробирки укладывают в наклонном положении в свертыватель, предварительно нагретый до 90ºС. Среду коагулируют 20 минут при температуре 82-83ºС. Контроль приготовленной партии среды на стерильность осуществляют также, как описано для среды Левенштейна-Йенсена.
Хранение пробирок с питательной средой. Пробирки с питательной средой могут храниться в холодильнике при температуре 50С в течение 4 недель. При длительном хранении необходимо пробирки герметично укупорить и поместить в полиэтиленовые пакеты, чтобы предотвратить высыхание среды
Приложение 3.
Материалы и оборудование, необходимые для проведения испытаний
Химические вещества:
Магний сернокислый MgSO4 x 7H2O — ГОСТ 4523 – 77;
Натрий лимоннокислый C6H5O7Na3 x 5,5H2O — ГОСТ 22280 – 86;
Калий фосфорнокислый однозамещенный KH2PO4 — ТУ-6-09-5324-87;
Натрий пировинограднокислый - ТУ 6-09-08-990-83;
Глицерин C3H8O3 — ГОСТ 6259 – 75;
Малахитовый зеленый C52H54O12N4 — ТУ-6-09-1557-77;
Вода дистиллированная — ГОСТ 6709 – 77;
Желтки куриных яиц;
Магний лимоннокислый Mg3(C6H5O7)2 x 14H2O — ТУ-6-09-1770-77;
L- аспарагин C4H8N2O3 x H2O — импортный реактив;
Миддлбрук 7Н9 порошок бульона – импортная среда;
10% ADC ростовая добавка – импортный реактив;
нейтрализующий бульон Ди-Ингли – фирма HIMEDIA;
спирт этиловый, ректификационный технический, ГОСТ 18300-72;
стерильная дистиллированная вода;
Оборудование:
Весы лабораторные (например, весы для химических реактивов с точностью до 0,01г, ГОСТ 24104-80, рекомендованные к применению приказом МЗ РФ №109).
Аппарат для свертывания питательных сред (например, АСПС – «Торгмаш», рег.№ 29/07020401/3573-02).
Термостат на 370С (например, термостат суховоздушный ТВ-80-«ПК-К», рег. №98/219-151).
Низкотемпературная морозильная камера для хранения тест-культур микроорганизмов (например, морозильник сверхнизких температур MDF – 4086S, рег. № 60202380).
Камера на 1 или 2 м3 с необходимыми приспособлениями для изучения обеззараживания воздуха.
Микроскоп.
Аэрозольный генератор.
Гидропульт, автомакс, «Квазар».
Шейкер (например, шейкер лабораторный S-3.02, рег.№14413 ГОСТ 12.2.05.).
Бытовой холодильник (например, холодильник-морозильник STINOL 256Q сер.№ 103410881041).
Плита электрическая бытовая, ГОСТ 14919-83.
Штативы лабораторные химические, ТУ 48-0534-8-87.
Тест-объекты: ткань бязевая или батистовая; поверхности размером 10х10см из различных материалов; предметы ухода за больными; игрушки мелкие и крупные из различных материалов; медицинские инструменты разнообразные по форме, характеру поверхности и материалу; жесткий и гибкий эндоскопы; набор резиновых и пластиковых трубок; столовая посуда и приборы; лабораторная посуда и посуда из-под выделений; бинты, вата.
Секундомер механический, ГОСТ 8.423-81;
Термометры, ГОСТ 215-73;
Карандаш по стеклу, ТУ 46-22-904-78;
Лабораторная посуда:
Пипетки вместимостью 1,0 и 10,0 см3 2-го класса точности, ГОСТ 20292-74;
Пробирки химические, ГОСТ 10515-6;
Чашки Петри, ГОСТ 25336-82;
Спиртовка лабораторная, ГОСТ 25336-82 или газовая горелка;
Цилиндры вместимостью 100,0 и 250,0 см3, ГОСТ 1770-74;
Колбы вместимостью 100,0; 250,0 и 1000,0 см3 ГОСТ 25 336-82;
Склянки Дрекселя.