Требования к устройству и эксплуатации камер. Воспроизведение условий эксперимента
- Особенности постановки эксперимента требуют дифференцированного подхода к выбору оригинальной конструкции затравочных камер, приспособленных для постоянного пребывания в них животных.
- Работа может производиться как в герметичных, так и в негерметичных камерах в зависимости от условий опыта.
- Конструкция камеры должна обеспечивать быструю уборку, смену корма, воды.
- В камере необходимо предусмотреть регулировку и регистрацию температуры, воздухообмена, влажности воздуха и барометрического давления, а по возможности содержания кислорода и углекислоты. Это позволит моделировать в различных сериях эксперимента условия вентилируемых помещений. Постановка эксперимента в условиях вентилируемой емкости требует, чтобы создаваемый в каждой камере воздухообмен был не ниже допустимых гигиенических норм.
- Сроки выдержки образцов материалов от момента изготовления до начала исследования должны быть не менее 1 месяца и не более 6 месяцев. Перед исследованием поверхность образцов следует тщательно очистить от пыли, влаги и случайных примесей.
- При проведении эксперимента с моделированием условий исследуемый материал должен помещаться либо в затравочную камеру и размещаться с животными, либо в климатическую камеру с последующей подачей газовоздушной смеси в камеры с животными. Аналогично следует поступать при изучении комплексов материалов. При размещении отдельных материалов или комплексов в камерах с животными необходимо предусмотреть их размещение, исключающее контакт с животными и их экскрементами.
- Отбор проб воздуха из затравочной камеры для химических анализов производится для определения основных компонентов исследуемой смеси не менее одного раза в неделю с соблюдением общих правил. Результаты заносятся в регистрационный журнал учета концентраций.
- Оценку типовых комплексов ПСМ следует проводить в стендовых условиях. В качестве стендов могут быть использованы специальные камеры, объемом 18 - 20 м3, изготовленные из инертных материалов, имеющие автономную систему вентиляции и регулировку температуры. При отсутствии таких возможностей для этих целей могут быть использованы помещения, имитирующие жилую комнату, в которых должны отсутствовать источники выделения токсичных веществ. Аналогичная комната должна быть для размещения животных контрольной группы.
Исследования комплексов ПСМ должны проводиться в хроническом круглосуточном эксперименте.
Методы выявления изменений, возникающих в организме под влиянием вдыхания летучих компонентов полимерных композиций
Выбор соответствующих показателей и методов, а также объем планируемых исследований в каждом конкретном случае определяется особенностями токсического действия исследуемого комплекса летучих веществ и необходимостью применения общепринятых интегральных тестов и некоторых специфических показателей.
Определение показателей должно быть начато за 2 - 3 недели до начала эксперимента. В зависимости от их характера следует строго дифференцировать сроки определения каждого. После установления исходных величин должны быть намечены сроки определения соответствующих показателей в процессе последующих опытов.
При выборе показателей и тестов, а также при последующей оценке полученных сдвигов необходимо учитывать характер и диапазон "физиологических колебаний" того или иного показателя. При этом не может быть однотипного подхода к оценке анализируемых сдвигов, т.к. в одних случаях даже чрезвычайно широкие колебания исследуемого показателя укладываются в "физиологическую норму", а в других - даже весьма незначительные уже свидетельствуют о развитии патологического процесса. При изучении факторов малой интенсивности получаемый статистически значимый полиморфизм данных следует трактовать как результат токсического воздействия.
В эксперименте могут быть применены различные функциональные нагрузки: длительная мышечная работа, вращение в центрифуге, гипоксия, воздействие некоторых фармакологических агентов и др. Если при функциональной нагрузке в организме животного возникает патологическое состояние, значит достигнутое при токсическом воздействии "равновесие", обусловленное напряжением компенсаторных защитных механизмов, находится на грани "повреждения". Если же при функциональной нагрузке реакции организма не отличаются от таковых у контрольных животных или от сдвигов, наблюдавшихся у животных до нагрузки, то следует полагать, что регистрируемые сдвиги находятся в пределах физиологических норм защиты.
Схемы исследований влияния газовыделений из полимерных материалов на организм в хроническом эксперименте (Прилож. 2)
На всех схемах значком "*" обозначены тесты, исследования которых не являются обязательными, проводятся при наличии экспериментальной базы, а необходимость проведения определяется экспериментаторами.
Схема № 1 - Изучение общего состояния организма. Используются общепринятые методы определения.
Схема № 2 - Изучение функционального состояния центральной нервной системы (ЦНС).
Схема предусматривает изучение корковых, подкорковых и обменных процессов.
Для изучения энергетического обмена - ферментный состав цикла трикарбоновых кислот, биосинтез аскорбиновой кислоты в гомогенатах мозга.
Схема № 3 - Изучение неспецифической реактивности организма. Схема включает, в основном, оценку влияния токсических газовыделений на гипофизадреналовую систему, фагоцитарную активность нейтрофилов крови, активность лизоцима, фракционный состав белков крови и др.
Схема № 4 - Изучение функционального состояния печени. Рекомендуется исследовать белковый, липидный, углеводный и энергетический виды обмена, специфическую ферментативную активность, биосинтез аскорбиновой кислоты.
Схема № 5 - Изучение функционального состояния сердца. Определяющими могут быть показатели ЭКГ, не менее 100 кардиоциклов, артериальное давление, специфическая ферментативная активность, энергетический и липидный обмены.
Схема № 6 - Изучение функционального состояния почек. Схема предусматривает определение показателей выделительной функции, фильтрационной способности, энергетического обмена.
Схема № 7 - Изучение функциональной способности кроветворной системы. Предусматривается определение форменных элементов крови, лейкоцитограмма, биосинтез аскорбиновой кислоты в селезенке.
Схема № 8 - Изучение гонадотропного действия. Включает функциональное состояние сперматозоидов, морфологические показатели, белковый и энергетический обмены, окислительно-восстановительные процессы. Для характеристики функционального состояния сперматозоидов может применяться определение индекса токсичности на сперматозоидах крупного скота.
Схема № 9 - Изучение аллергенной активности производится в тех случаях, когда к этому есть прямые показания. Предусматривается использование одного из методов определения аллергенности в моделированных условиях вне организма и конъюнктивальной пробы на морских свинках.
Схема № 10 - Морфологическое и гистохимическое исследование внутренних органов.
Помимо основных предложенных схем по показаниям должны проводиться исследования отдаленных последствий: мутагенное действие, тератогенное действие и изучение генеративной функции.
Рекомендуемые схемы исследований не являются строго обязательными во всех случаях. Выбор тестов должен производиться в зависимости от цели исследования, а также возможности лаборатории.
При токсиколого-гигиенической оценке ПСМ могут быть использованы так называемые альтернативные методы, т.е. исследования на биологических моделях in vitro. Такие исследования позволяют дать оценку интегральной токсичности в короткие сроки и без существенных материальных затрат. Эти методы хорошо применимы при скрининговых исследованиях и позволяют получить предварительные результаты исследования токсичности. Выполнение исследований должно проводиться по методическим указаниям или рекомендациям, утвержденным в установленном порядке (см. методическое пособие "Альтернативные методы исследований (экспресс-методы) для токсиколого-гигиенической оценки материалов, изделий и объектов окружающей среды").
Обобщение результатов исследования, обоснование выводов и рекомендаций
Для проведения статистической обработки существует ряд специальных параметрических и непараметрических методов. В тех случаях, когда результаты имеют правильное распределение и приближаются по форме к кривой Гаусса, может быть рекомендована в качестве оптимальной обработка параметрическим методом с использованием критерия Стьюдента. В случаях, если не имеется нормального распределения ряда, следует использовать непараметрические методы: критерий Вилкоксона, критерий Ван дер Варденена, Х2 и др. Для измерения связи может быть использован коэффициент корреляции.
В зависимости от получаемых результатов и задач, стоящих перед исследователем, экспериментатор сам выбирает тот или иной метод статистической обработки и степень значимости обнаруженных изменений (от 95 до 99%) в зависимости от точности и специфичности выбранного метода исследования.
В сводных таблицах должны быть указаны: число наблюдений (n), средняя арифметическая (M), ошибка средней арифметической (±m) и величина критерия Стьюдента (t).
При обработке материалов непараметрическими методами статистики в таблицах также необходимо представлять среднеарифметические величины (М) и их средние ошибки (±m).
Обоснование и оформление заключения
При обосновании заключения о результатах проведенных токсикологических исследований следует, прежде всего, сопоставить конкретные данные отдельных опытов с теми концентрациями токсических веществ в воздухе экспериментальных камер, при которых были выявлены какие-либо изменения.