«Ставропольский нипчи» (стр. 6 из 13)

6.5.6. Для определения заклещевленности индеек посещают хозяйства, в которых эти птицы содержатся на свободном выпасе. У птицы осматривают голые участки шеи и ушные раковины. Обнаруженных клещей собирают и помещают в этикетированную пробирку с ватно-марлевой пробкой и зеленым листом злакового растения внутри.

6.5.7. Для оценки развития резистентности клещей к различным акарицидным средствам проводят определение чувствительности клещей к ним, используя утвержденные методы определения эффективности акарицидов, с соблюдением мер биологической безопасности работы с материалом, подозрительным на зараженность микроорганизмами I - II групп патогенности.

6.6. Многолетние наблюдения на стационарах

6.6.1. Участки для организации стационарных наблюдений выбирают на территории административных районов, где зарегистрировано наибольшее количество больных КГЛ. Они должны включать несколько типов сельскохозяйственных и природных ландшафтов, характерных для очага в целом. Кроме того, на территории стационара должны быть населенные пункты, жители которых имеют типичный для очага в целом контакт с окружающей природной средой.

6.6.2. Основными задачами исследований на стационарах являются изучение биоценотической структуры очага и её динамики, численности млекопитающих и птиц, которые являются элементами паразитарной системы КГЛ; изучение внешних и внутренних факторов, влияющих на эпидемические проявления очага; отработка комплекса профилактических мероприятий; изучение воздействия антропогенных и природных факторов на динамику эпизоотического процесса; составление эпидемиологических и эпизоотологических прогнозов.

6.6.3. Изучение биоценотической структуры очага и динамики его эпизоотической активности предполагает определение видового состава, обилия, стациального распределения основных видов диких животных - носителей вируса ККГЛ и прокормителей различных фаз развития пастбищных клещей; наблюдение за сезонными и многолетними изменениями численности животных; отлов, отстрел и доставку в лабораторию для вирусологического, серологического и паразитологического исследований диких млекопитающих и птиц; наблюдение за эффективностью противоклещевых мероприятий.

6.6.4. При проведении всех этапов эпизоотологического обследования руководитель зоогруппы ведет рабочий дневник и заполняет карту-основу. В дневнике регистрируются результаты проведения этапов работы, а также все сведения, полученные в результате эпизоотологического обследования.

6.6.5. Карта-основа к окончанию сезона обследования должна содержать в виде масштабных и немасштабных обозначений информацию об интенсивности эпизоотологического обследования, распределении и численности диких прокормителей клещей Н. marginatum, размещении пастбищ, овощебахчевых культур, зон отдыха (организованных и неорганизованных), участках, обработанных акарицидными препаратами, о фактах инфицированности в текущем году возбудителем КГЛ клещей и млекопитающих, а также сведения о положительных серологических находках.

6.7. Исследование полевого материала

6.7.1. Материалом для исследования служат иксодовые клещи, органы птиц и грызунов (головной мозг, печень), пробы крови крупного и мелкого рогатого скота.

6.7.2. Подготовка клещей

Клещей группируют по видам, полу, месту и времени сбора. Взрослых голодных или полунапившихся клещей (имаго) объединяют в пулы по 10 экземпляров, нимф – от 20 экз. до 50 экземпляров, личинок – не менее 200 особей. Напившихся особей исследуют индивидуально.

Для исследования методом ИФА клещей однократно промывают физиологическим раствором. Замораживают при температуре минус 20 ^оС или в жидком азоте в течение нескольких часов. Далее клещей тщательно растирают в фарфоровой ступке и к гомогенатам добавляют раствор, заложенный в диагностическую тест-систему, из расчета 0,2 мл на одного клеща. При отсутствии специальной среды для разведения образцов используют 0,9 % раствор натрия хлорида (физиологический раствор). Полученную суспензию переносят в коническую пробирку и инактивируют на водяной бане при температуре плюс 56 ^оС в течение 30 мин. Осветленную после центрифугирования или отстаивания суспензий в течение 1 - 2 ч при температуре 4 ^оС надосадочную жидкость используют для исследования. При необходимости повторного исследования проб в более поздние сроки в суспензии добавляют мертиолят натрия до конечной концентрации 1:10000 или антибиотики (80 мг гентамицина на 1 л среды или 500 ЕД пенициллина и 500 ЕД стрептомицина на 1 мл среды) и хранят при температуре 4⁰С или замораживают.

Для исследования методом ПЦР клещей однократно промывают физиологическим раствором. Затем замораживают при температуре минус 20 ^оС или в жидком азоте в течение нескольких часов. Переносят в охлажденную фарфоровую ступку, добавляют охлажденную транспортную среду (физиологический раствор) и гомогенизируют. Переносят пробу в микроцентрифужную пробирку, используя наконечники с аэрозольным фильтром. Полученную пробу центрифугируют при 5000 об/мин в течение 1 мин для осветления материала. РНК выделяют из надосадочной жидкости. РНК вирусов быстро гидролизуется РНК-азами, поэтому РНК-содержащий материал должен подвергаться немедленному исследованию или храниться при температуре минус 70 ^оС.

Для вирусологического исследования каждую пробу отмывают стерильным физиологическим раствором не менее 5 раз. Далее клещей замораживают при температуре минус 20 ^оС или в жидком азоте в течение нескольких часов. Затем клещей помещают в стерильную охлажденную ступку и тщательно растирают с физиологическим раствором или с культуральной средой. Для инактивации бактериальной флоры добавляют антибиотики (80 мг гентамицина на 1 л среды или 500 ЕД пенициллина и 500 ЕД стрептомицина на 1 мл среды). Приготовленную в ступке взвесь помещают в пробирку и центрифугируют 10-15 мин при 3000 об/мин при охлаждении. Подготовленные суспензии до момента заражения новорожденных белых мышей или культуры клеток помещают в сосуд с тающим льдом. Исследуют надосадочную жидкость.

6.7.3. Подготовка суспензий органов животных.

Кусочки органов (головной мозг, печень) растирают в фарфоровой ступке пестиком, добавляя при этом небольшое количество стерильного стеклянного песка, и раствор для разведения образцов, заложенный в диагностическую тест-систему (4 мл на 1 г органа), а при его отсутствии физиологический раствор. Полученную суспензию инактивируют и исследуют надосадочную жидкость, как указано в п. 10.2.

6.7.4. Проведение иммуноферментного анализа осуществляют согласно инструкциям, прилагаемым к тест-ситемам «ВектоКрым-КГЛ-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», г. Кольцово Новосибирской обл.) и «ИФА-АГ-КГЛ » (ЗАО Биотехнологическая компания «Биосервис», г. Боровск Калужской обл.).

6.7.5. Для выявления РНК вируса ККГЛ в суспензиях клещей используют метод ОТ-ПЦР в соответствии с инструкцией к тест-системам («Ампли Сенс^® ККГЛ», ООО «ИнтерЛабСервис», ФГУН ЦНИИЭ, г. Москва, и «ГенКонго», ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб», г. Саратов).

6.7.6. В сыворотках крови животных определяют антитела класса G к вирусу ККГЛ с помощью конъюгата белка А с пероксидазой хрена производства НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Л. Пастера (г. Санкт-Петербург).

6.7.7. Вычисление вирусофорности клещей проводят по формуле (Беклемишев В.Н., 1963):

где

X - процент зараженных эктопаразитов в исследуемой партии; lg N - десятичный логарифм общего числа исследований; lgn_o - десятичный логарифм числа исследований, давших отрицательный результат; m - число эктопаразитов в пробе (пробах).

7. Противоэпидемические мероприятия

7.1. Мероприятия в эпидемических очагах

7.1.1. В силу специфических особенностей КГЛ как природно-очаговой болезни (наличие множественных источников инфекции в природных биотопах, общественных хозяйствах и на частных подворьях) эпидемическим очагом КГЛ следует считать поселение, где возник хотя бы один случай заболевания, расположенное на энзоотичной территории в тех её пределах, в которых источник может передавать возбудителя здоровым людям в данной конкретной обстановке. Напротив, эпидемическим очагом в населенном пункте, расположением вне энзоотичной территории, можно считать место нахождения больного (квартира, отдельное домовладение и т.п.), заразившегося во время пребывания на природно-очаговой территории.

7.1.2. Противоэпидемические мероприятия на территории очага, а также в хозяйствах, на предприятиях и в населенных пунктах, имеющих территориальную связь с эпидемическим очагом, включают:

- госпитализацию больного;

- определение времени возникновения заболевания, места нахождения больного и границ очага;

- выявление лиц, бывших в контакте с больным;

- выявление больных с подозрением на КГЛ по совокупности клинических и эпидемиологических данных;

- выявление лиц, имевших укусы и контакты с клещами (наползание, снятие с себя, с животного, раздавливание);

- изучение причин посещения населением природного очага КГЛ;

- выявление источника возбудителя инфекции (больной человек, клещ, животное), путей передачи, непосредственных причин возникновения очага и условий, способствующих заражению людей;

- забор крови от больного и лиц, имевших контакт с клещами, для вирусологического, молекулярно-генетического и серологического исследований;

- эпизоотологическое обследование территории, примыкающей к очагу;

- забор крови от домашних животных специалистами ветеринарной службы с целью установления иммунной прослойки среди поголовья;

- подворные обходы в населенном пункте;

- составление эпидемиологического прогноза;

- заключение по эпидемиологическому обследованию в очаге.

Эпидемиологическое обследование очага со случаем (случаями) заболевания КГЛ осуществляют с заполнением на каждого больного карты эпидемиологического обследования (учетная форма № 257).