Объектами для исследования вирусологическим, серологическим и молекулярно-биологическим методами являются:
- комары;
- иксодовые клещи;
- птицы;
- мелкие млекопитающие.
Направления оформляются по форме, приведенной в Прилож. 6.
Подготовка образцов проводится в соответствии с инструкциями, прилагаемыми к тест-системам для постановки ИФА, РАО, ОТ-ПЦР. Для скринингового исследования членистоногих объединяют в пулы: комаров - по 50 особей и менее, клещей - не более 10 голодных особей.
Подготовка суспензий органов животных проводится общепринятым методом с использованием раствора для разведения образцов, заложенного в диагностические тест-системы. При заборе органов и приготовлении суспензий в полевых и лабораторных условиях необходимо принять меры для исключения перекрестной контаминации: для получения и обработки проб от каждого животного используют отдельный комплект инструментов и одноразовую посуду.
В случае необходимости длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре от -20 до -70 °C.
Приложение 1
(справочное)
ЛЕЧЕНИЕ ЛИХОРАДКИ ЗАПАДНОГО НИЛА
Показания для госпитализации. Больные госпитализируются по клиническим показаниям: лихорадка свыше 39 °C в сочетании с интоксикацией, интенсивной головной болью, тошнотой или рвотой, менингеальный синдром, расстройства сознания, другие неврологические нарушения в сочетании с лихорадкой. Больные с глубоким нарушением сознания, генерализованными судорогами, нарушением функций госпитализируются в отделение реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ).
Принципы лечения больных ЛЗН. Эффективность противовирусных препаратов для лечения ЛЗН не доказана, поэтому рекомендуется синдромальная терапия. Для борьбы с отеком-набуханием головного мозга и церебральной гипертензией применяют фуросемид (лазикс) взрослым 20 - 60 мг в сутки, детям - 0,5 - 1,0 мг/кг массы в сутки с обязательной компенсацией потерь жидкости и поддержанием нормального объема циркулирующей крови (ОЦК). В тяжелых случаях (кома, нарушение дыхания, генерализованные судороги) назначают дополнительно дексаметазон (дексазон) в дозе 0,25 - 0,5 мг/кг в сутки в течение 2 - 4 суток. Дезинтоксикация и компенсация потерь жидкости осуществляется путем внутривенных инфузий полиионных растворов (оптимальный раствор "трисоль"), поляризующей смеси и коллоидных растворов (10% раствора альбумина, криоплазма, реополиглюкин, реоглюман) в соотношении 2:1. Оптимальный суточный объем вводимой жидкости, включая пероральное и зондовое введение, 3 - 4 л для взрослых и 100 мл/кг для детей.
Для борьбы с гипоксией используются ингаляции кислорода через назальные
катетеры. По показаниям: чрезмерная одышка (ЧД в 2,5 и более раз выше
нормы или частота дыхания в два раза меньше нормы), стойкая гипоксия (PaO
2
менее 70 мм рт. ст.), гипокапния (PaCO менее 25 мм рт. ст.) или
2
гиперкапния (PaCO более 45 мм рт. ст.), кома, генерализованные судороги -
2
больные переводятся на ИВЛ. Проводится коррекция электролитных нарушений и
осмолярности крови.
По индивидуальным показаниям назначают противосудорожные, седативные препараты, антиоксиданты, средства, улучшающие мозговой кровоток (пентоксифиллин и др.), при наличии вторичных бактериальных осложнений - антибиотики.
Больным необходимо полноценное энтерально-парентеральное питание, включая комплекс витаминов и микроэлементов, полноценный уход (профилактика гипостатической пневмонии, пролежней, контроль стула и диуреза).
Выписка больных проводится после стойкой нормализации температуры, регресса неврологических нарушений и санации СМЖ. Минимальная продолжительность стационарного лечения для больных с нейротоксикозом - 10 суток, менингитом - 20 суток, менингоэнцефалитом - 30 суток. После выписки из стационара больные с неврологическими нарушениями нуждаются в диспансерном наблюдении неврологом до полного восстановления трудоспособности и регресса неврологической симптоматики.
Приложение 2
(обязательное)
ПРАВИЛА
ОТБОРА И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНЫХ
И ПОДОЗРИТЕЛЬНЫХ НА ЗАРАЖЕНИЕ ЛЮДЕЙ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
НА ЛИХОРАДКУ ЗАПАДНОГО НИЛА
1. Для предохранения от инфицирования медицинского персонала и пациентов при сборе проб биоматериалов и доставке его в лабораторию необходимо:
- не загрязнять наружную поверхность посуды при сборе и доставке проб;
- не загрязнять сопроводительные документы (направления);
- свести к минимуму непосредственный контакт пробы биоматериала с руками медицинского работника, собирающего и доставляющего его в лабораторию;
- соблюдать асептические условия для предотвращения инфицирования пациента в процессе выполнения инвазивных мероприятий;
- собирать пробы в стерильную одноразовую посуду;
- транспортировать пробы в переносках или укладках с раздельными гнездами.
2. Для серологического исследования необходимо двукратное взятие крови. Первую пробу берут при первых признаках болезни, при подозрении на ЛЗН, вторую - через 10 - 14 дней после первого забора крови. Кровь забирают в асептических условиях из вены в количестве 5 - 8 мл в стерильную пробирку и закрывают стерильной пробкой.
3. Для вирусологического исследования берут кровь не позднее 5-го дня болезни, в стадии вирусемии.
4. Кровь должна быть доставлена в вирусологическую лабораторию в течение первых 24 ч с момента взятия в термосе или сумке-холодильнике с холодовыми элементами. Транспортируют кровь при температуре от 0 до 8 °C:
Цельную кровь нельзя замораживать, так как это ведет к полному гемолизу. Кровь становится непригодной для серологических исследований и приобретает токсические свойства для лабораторных животных и тканевых культур.
Сопроводительный документ (направление) тщательно упаковывают в полиэтиленовый пакет и прикрепляют к емкости с клиническим материалом.
5. Обработка проб крови для серологического анализа в лаборатории. Кровь центрифугируют в течение 10 - 15 мин. при 2500 об./мин., сыворотку отделяют от осадка и используют для серологических исследований.
6. При посмертной диагностике берут кусочки мозга (из разных отделов), печени и селезенки. Взятый материал помещают в стерильные флаконы с пробками, которые помещают в полиэтиленовые пакеты, завязывают и опускают в термос со льдом.
7. Если материал для выделения вируса может быть доставлен в лабораторию в течение 2 - 4 ч, то достаточно поместить его в термос со льдом при температуре от 0 до 8 °C. В лаборатории кусочки тщательно измельчают и готовят 10% суспензию в растворе Хенкса (или в фосфатно-буферном растворе, или питательной среде), поддерживая температуру обрабатываемого материала на уровне 5 °C. Суспензию центрифугируют в течение 15 мин. при 2500 об./мин. Прибавляют к надосадочной жидкости пенициллин и стрептомицин по 100 - 200 ЕД/мл и используют ее для заражения белых мышей или клеточных культур.
Если доставка материала требует нескольких дней, то его транспортируют в термосах с азотом или сухим льдом. В этом случае до замораживания нужно отделить сыворотку крови от сгустка.
8. Для проведения ОТ-ПЦР забор плазмы крови и спинномозговой жидкости проводят не позднее 12 дня от начала заболевания. Материал для обследования методом ПЦР (плазма и/или сыворотка крови, СМЖ, образцы других тканей, моча) должен забираться с использованием только одноразовых пробирок и медицинского инструментария с соблюдением правил асептики и храниться при температуре -70 °C или в жидком азоте, не допуская его оттаивания до проведения исследования.
Приложение 3
(обязательное)
ПРАВИЛА
ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ ПОЛЕВОГО МАТЕРИАЛА
Любой материал, собранный из внешней среды, считается потенциально опасным в отношении возможного заражения природно-очаговыми инфекциями, свойственными той ландшафтной зоне, в пределах которой он собран.
В соответствии с СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности" доставка собранного материала должна осуществляться следующим образом:
- комаров и клещей доставляют живыми в пробирках с ватно-марлевыми пробками (влажные камеры), помещенных в металлические пеналы, или замороженными в жидком азоте, а также на сухом льду;
- мозг грызунов и птиц упаковывают в пластиковые флаконы с герметичными крышками.
Весь собранный и упакованный соответствующим образом материал должен немедленно помещаться на холод (4 - 6 °C) в сумки-холодильники и доставляться в лабораторию в пределах 24 часов от момента отбора проб.
Хранение и транспортирование в течение более длительного времени осуществляется в жидком азоте или на сухом льду. Весь отобранный материал снабжается соответствующим направлением.
Приложение 4
(обязательное)
ИНФОРМАЦИЯ
О СОСТОЯНИИ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ ЛЗН И ПРОВЕДЕННЫХ МЕРОПРИЯТИЯХ,
ПРЕДСТАВЛЯЕМАЯ В РЕФЕРЕНС-ЦЕНТР ПО ЛЗН УЧРЕЖДЕНИЯМИ
РОСПОТРЕБНАДЗОРА (В СУБЪЕКТЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ)
Таблица 1
Число
зарегистрированных и подозрительных на заболевание
ЛЗН случаев на "____" "_____" "___" (с нарастающим итогом)
дата месяц год
| Всего | В т.ч. у детей до 14 лет | ||
| 1 | Зарегистрировано больных с заболеванием ЛЗН (сумма строк 2 + 3 + 4). Из них: | ||
| 2 | госпитализировано | ||
| 3 | выписано | ||
| 4 | умерло | ||
| 5 | Число больных, у которых диагноз подтвержден лабораторно | ||
| 6 | Число госпитализированных с провизорной целью (сумма строк 7 + 8) | ||
| В т.ч.: | |||
| 7 | по клиническим показаниям, подозрительным на заболевание ЛЗН, и имеющих в анамнезе укус комара | ||
| 8 | по клиническим показаниям, подозрительным на заболевание ЛЗН, и не имеющих в анамнезе укус комара |
Таблица 2