Методические указания к лабораторным работам по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов» для специальности 2710«Технология молока и молочных продуктов (стр. 11 из 12)

Порядок проведения работы. Бутылку (колбу на 0,25, 0,5 или I л) тщательно вымыта, закрыть ватно-марлевой пробкой, накрыть бумажным колпачком, завязать у горловины и стерилизовать в автоклаве при 120°С в течение 30 мин. Стерилизации можно провести сухим парой в печи Пастера (обычный сушильный шкаф) при 150 С в течение двух часов или при 100°С в течение одного часа. Для проб хлорированной воды в бутылки перед стерилизацией внести 2 мл 1,5%-ного раствора тиосульфата натрия. В посуду, стерилизованную сухим паром, вносят перед отбором пробы 2 мл тиосульфата натрия.

Кран или край спускной трубки обжечь паяльной лампой или кольцевым зажженным ватным тампоном, пропитанным спиртом. Открыть кран и в течение 10-15 минут воду спустить, после чего произвести отбор проба, Бутылку развязать, вынуть пробку имеете о бумажный колпачком, а набрать пробу непосредственно в подготовленную посуду, стараясь, не замочитьватную пробку. Закрыть бутылку пробкой над огнем и завязать. Вода подлежит анализу не после 2-х часов после отбора.

Задание 3 Определить общее количество микроорганизмов в смыве с рук.

Порядок проведения работы. Стерильным тампоном, смоченным в стерильной воде (физиологическом растворе) протереть ладони, тыльную поверхность рук, под ногтями и между пальцами обеих рук. Тампон погружают в ту же, пробирку, в которой производилось смачивание, хорошо взбалтывают, отбираю г I мл раствора стерильной пипеткой и готовят разведения (1:10, 1:100). Для определения общего количества микроорганизмов в I мл смыва провести посев разведении на мясопептонный агар. Чашки подписать с указанием разведения даты, группы, фамилии учащегося. Чашку с посевом поместить в термостат при 37°С на 48 часов. Остаток смыва вместе с тампоном высеять в пробирки с поплавками (рис. 9.), добавить в них по 5 мл среды Кесслера в выращивать в течение 24 часов при температуре 43°С.

Затем подсчитать количество выросших колоний и определить наличие кишечной палочки.

Чистоту рук оценивают по количеству микроорганизмов в I мл смыва при отсутствии кишечной палочки:

Рис.9.

Количество микроорганизмов Оценка чистоты

в I мл смыва с рук

1000 отлично

1000-5000 хорошо

5000-10000 удовлетворительно

свыше 10000 плохо

В рабочую тетрадь занести результаты определения и сделать соответствующие выводы.

Задание 4. Определить общее количество микроорганизмов в смыве с оборудования

Порядок проведения работы. Перед взятием пробы трафарет смочить спиртом, обжечь и наложить на исследуемую поверхность. Ограниченную площадь промыть смоченным в воде (или в физиологическом раствора) тампоном, после чего тампон опустить в ту же пробирку и хорошо перемешать. Высеять I мл смыва па мясопептонный агар в чашку Петри, поместить ее в термостат при 37°С на 48 часов, затем определить общее количество микроорганизмов. Остатки смывной жидкости вместе с тампоном засеять в пробирки с поплавками и 5 мл среды Кесслера и выдержать при 43°С 18-24 часа. Па пробирке указать дату- группу, место смыва. Результаты определения и выводы записать в рабочую тетрадь.

По окончании выдержки посевов на среду Кесслера пробирки рассмотреть и отметить газообразование и помутнение. Если рост микроорганизмов при исследовании смывов отсутствует, анализ заканчивают и считают, что в исследуемых смывах кишечная палочка отсутствует.

Задание 5. Определить наличие кишечной палочки

Порядок проведения работы. Если в среде Кесслера наблюдается помутнение или газообразование, то сделать посев штрихом на среду Эндо, чтобы выросли изолированные колонии. Дно чашки разделить на несколько секторов, из пробирок сделать высев на отдельный сектор. Чашку с посевом поместить в термостат на 24 ч при 37°С. Просмотреть засеянную чашку со средой Эндо в описать выросшие колонии. Отметить наличие или отсутствие типичных для кишечной палочки колоний, имеющих тёмно-красный цвет с золотистым металлическим блеском.

Вопросы для самопроверки

1 Сколько микроорганизмов допускается в 1 м3 чистого воздуха.?

2 Какими методами определяют количество микроорганизмов в воздухе?

3 Количественные микробиологические показатели микрофлоры воды и методы их определения?

4 Дайте определения понятиям коли-титр, коли-индекс. Чему равны эти показатели для питьевой воды?

5 Каковы морфологические и физиологические признаки кишечной палочки?

6 На что указывает наличие кишечной палочки на руках и на оборудовании?

7 Укажите порядок проведения смыва с рук и оборудования.

8 Какова последовательность обнаружения кишечной палочки в смыве?

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

Пробы, отбор и подготовка к анализу

Для микробиологических испытаний отбирают единицы продукции, не имеющие по внешним признакам дефектов упаковки и продукта. Единица продукции - отдельные экземпляры штучной продукции или определенное количество нештучной или штучной продукции.

Пробы для микробиологических испытаний отбирает микробиолог или другое ответственное лицо. Пробой называется определенное количество единиц продукции, отобранной для контроля. Пробой продуктов специального назначения считается отдельный экземпляр продукции в упаковке, защищающей продукт от внешней среды (1 туба, 1 банка, 1 пакет, 1 плод и т.д.).

Для микробиологического контроля от любой партии продуктов из разных мест отбирают выборку, состоящую не менее чем из трех проб. Выборка - количество проб (изделий), отобранных для контроля из партии или потока продукции. Отобранную пробу помещают в посуду или упаковывают в фольгу, плотную бумагу, не допуская повреждения упаковки. Каждую отобранную, пробу (единицу продукции) маркируют в соответствии с кодом контролируемой партии и нумеруют.

По результатам отбора проб составляют протокол, в котором указывают: номер протокола; место, дату и время отбора проб; цель микробиологического анализа; наименование продукта, изготовителя, тип тары; дату изготовления, смену и номер партии; результаты органолептического осмотра и обнаруженные дефекты тары и продукта.

Пробы хранят до начала анализа при комнатной температуре не более 24 ч, скоропортящиеся продукты - при температуре от 0 до +5°С не более 6—8 ч, быстрозамороженные - при температуре минус 12-18°С не более 24 ч.

Затем взвешивают навеску (навеска - это часть пробы определенной массы, используемая для приготовления исходного разведения или непосредственного высева в питательные среды) на специальной посуде, взятую стерильным инструментом. Твердые пищевые продукты предварительно измельчают в стерильной фарфоровой ступке (или другим способом). Для приготовления исходного разведения навеску (10 г) переносят в стерильную колбу со стерильным пептонно-солевым раствором (90 мл). Тщательно перемешивают круговыми движениями, дают отстояться 4-5 мин, получают 10^-1 разведение. Жидкость над осадком используют для приготовления последующих разведений, для этого 1 мл жидкости из колбы переносят в пробирку с 9 мл пептонно-солевого раствора, тщательно перемешивают, получают разведение 10^-2. Так повторяют несколько раз, получая те разведения, которые наиболее вероятны для данного продукта. Для высева в питательные среды используют разведения навески, которые позволяют получить в чашке Петри от 30 до 300 колоний. Количество специфических микроорганизмов должно быть меньше: например, стафилококков от 15 до 150 колоний, плесневых грибов от 5 до 50 колоний.

Высев можно производить либо в глубину, либо на поверхность питательной среды. Посев в глубину выполняется переносом 1 мл жидкости из соответствующего разведения в стерильную чашку Петри и заливается расплавленной и охлажденной до 45°С питательной средой и тщательно перемешивается круговыми движениями.

Высев на поверхность плотной, питательной среды осуществляется путем переноса 0,1-0,2 мл жидкости из соответствующего разведения и растирания сразу же досуха стерильным стеклянным шпателем по поверхности всей среды.

Методы определения отдельных групп микроорганизмов

Метод 1. Определение общего количества мезофилъных аэробных факультативно-анаэробных микроорганизмов

(КМАФАнМ) [27]

Настоящий метод распространяется на пищевые продукты, содержащие в 1 г 300 и более или в 1 мл 30 и более микроорганизмов и устанавливает порядок определения жизнеспособных клеток мезофилъных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Метод основан на высеве определенного количества продукта или

его разведений в агаризованную питательную среду, культивировании посевов в аэробных условиях при 30°С в течение 72 ч, подсчете всех выросших видимых колоний мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и пересчете их количества на 1 г (мл) продукта.

Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления исходного разведения, должна составлять не менее 10 г (мл), а предназначенной для непосредственного высева в питательные среды - не менее 1 г (мл).

Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений. По 1 мл продукта и или его разведений высевают одновременно в две стерильные чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую инокулум, добавляют не позднее чем через 15 мин расплавленную и охлажденную до 45°С плотную питательную среду. Среду немедленно и равномерно перемешивают с посевным материалом и оставляют для застывания в горизонтальном положении.

После застывания агаризованной среды посевы инкубируют, поставив чашки дном вверх, при 30°С в течение 72 ч.

Результаты оценивают по каждой пробе отдельно. На чашках, где выросло от 30 до 300 колоний, подсчитывают все колонии, суммируют и находят среднее арифметическое: Подсчитать колонии можно с помощью лупы с пятикратным увеличением. Полученное среднее арифметическое числа колоний округляют: если меньше 100, его округляют до ближайшего числа, делящегося на 5;