Учебно-методическое пособие Минск 2006 удк (стр. 7 из 9)
2. Провести контроль качества стерилизации.
Материалы: паровой стерилизатор, нестерильные инъекционные иглы; нестерильные бактериологические пробирки, бульон Хоттингера, тиогликолевая среда, бульон Сабуро, реактивы для окраски по Граму.
Методика стерилизации:
1. Провести предстерилизационную очистку и дезинфекцию игл: а) промыть иглы в проточной воде 5 минут; б) замочить иглы в горячем 3% растворе перекиси водорода с 0,5% препарата типа «Лотос» на 15 минут; в) прополоскать иглы струёй тёплой воды в течение одной минуты;
2. Поместить иглы в контейнер (бактериологические пробирки);
3. Простерилизовать иглы в автоклаве: давление 2,0 атмосферы, экспозиция 20 минут.
4. После стерилизации и охлаждения отметить на контейнере дату и способ стерилизации.
Методика контроля качества стерилизации (рис. 5):
1. В асептических условиях над пламенем спиртовки погрузить по одной простерилизованной игле в среды Хоттингера, тиогликолевую и бульон Сабуро;
2. Среды Хоттингера и тиогликолевую поместить в термостат при температуре 32оС, бульон Сабуро оставить при температуре 20-22 оС;
3. Наблюдать за помутнением сред в течение 8 дней;
4. В случае помутнения сделать препарат-мазок из помутневшей среды и окрасить его по Граму, микроскопировать для констатации наличия бактерий;
5. Дать заключение: стерилизация считается качественной, если во всех средах на протяжении восьми дней не появился рост бактерий.
Рекомендации по выполнению задания:
1. Стерилизацию провести в первый день, погружение простерилизованных игл в питательные среды - на следующем занятии;
2. Наблюдение за средами вести до появления помутнения, но не больше 8 дней. В случае помутнения одной из сред делают препарат-мазок и при обнаружении в нем бактерий дают заключение. Дальнейшее наблюдение за средами прекращают.
3. Выполнение задания оформляется в виде протокола в альбоме.
Инъекционные иглы
 |
 |
Стерилизованные бульон тиогликолевая бульон
иглы Хоттингера среда Сабуро
инкубация инкубация32оС– 8 сут. комн. t оС– 8 сут.
 | |
 | |
по Граму
Рис. 5. Методика контроля качества стерилизации инструментов
2.3. Контроль качества дезинфекции поверхностей в очагах
капельных инфекций
Цель: освоить методику контроля качества дезинфекции в очагах капельных инфекций.
Задания:
1. Провести дезинфекцию поверхностей 0,5% раствором хлорамина;
2. Проконтролировать качество дезинфекции.
Материалы: 0,5% раствор хлорамина; трафарет 10×10 см, поверхность лабораторного стола, взвесь суточной 1 млрд. культуры S. aureus, ватные тампоны для контаминации, стерильные тампоны, смонтированные в пробирке с 1 мл 1% тиосульфата натрия, среды: 6,5% солевой бульон, чашки с ЖСА, скошенный МПА, плазма кроличья, реактивы для окраски по Граму.
Методика:
1. Ограничить площадь лабораторного стола или иной поверхности трафаретом 10х10 см;
2. Контаминировать её тампоном, смоченным взвесью стафилококка (дважды по 1 мин); дать высохнуть;
3. Тщательно в течение 10 минут протереть тампоном, смоченным раствором хлорамина (не ниже 20оС), ограниченную трафаретом и контаминированную стафилококком поверхность.
Методика контроля качества дезинфекции:
1. Проводится не позднее 30-45 минут после дезинфекции;
2. Смыть стерильным ватным тампоном, смоченным в растворе тиосульфата натрия, продезинфицированную площадь (не выходя за границы трафарета);
3. Тампон опустить в пробирку с солевым бульоном;
4. Через 24 часа инкубации в термостате при 37оС из бульона сделать высев на ЖСА;
5. После 48-часовой инкубации в при 37оС подозрительные колонии высеять из ЖСА на скошенный МПА, поместить МПА в термостат на 24 часа при 37оС;
6. Сделать мазки с окраской по Граму из культуры на МПА и поставить пробу на плазмокоагулазу;
7. Ответ об обнаружении золотистого стафилококка дают на основании характера роста на питательных средах, характерной морфологии и положительного теста на плазмокоагулазу;
8. Заключение: дезинфекция считается качественной, если в посевах смывов не выделен золотистый стафилококк.
Рекомендации по выполнению задания:
1. В первый день провести дезинфекцию, сделать смыв и посеять его в солевой бульон; на второй день из солевого бульона сделать высев на среду ЖСА; на четвёртый день отсеять подозрительные колонии на скошенный МПА; на пятый день определить морфологию, поставить тест на плазмокоагулазу и дать заключение.
2. Выполнение задания оформляется в виде протокола в альбоме.
| Контаминация поверхности стола 10×10 см 1 млрд. взвесью стафилококка |  | Дезинфекция поверхности стола 0,5% раствором хлорамина | |  Контроль качества дезинфекции (смыв с поверхности стола) |
по Граму 
плазма МПА ЖСА солевой бульон
37оС – 24 ч. 37оС – 48 ч. 37оС – 24 ч.
Рис. 6. Общая схема исследования по контролю качества дезинфекции поверхностей в очаге капельных инфекций
2.4. Контроль качества дезинфекции поверхностей в очагах
кишечных инфекций
Цель: освоить методику контроля качества дезинфекции в очагах кишечных инфекций.
Задания:
1. Провести дезинфекцию посуды 0,5% раствором хлорамина;
2. Проконтролировать качество дезинфекции.
Материалы: 0,5% раствор хлорамина; взвесь суточной 1 млрд. агаровой культуры E. coli, ватные тампоны для контаминации чашек, стерильные тампоны, смонтированные в пробирках с 1 мл 1% тиосульфата натрия, среды: Кесслера, Эндо и ГПС; реактивы для окраски по Граму, кастрюля на 1-2 л., чашки Петри.
Методика:
1. Тампонами, увлажненными взвесью тест-микроба контаминировать внутреннюю поверхность чашки Петри.
2. Контаминированные E. coli и высушенные чашки Петри опускают в раствор хлорамина (температура не ниже 20оС);
3. После 15-минутной экспозиции чашки вынимают из дезраствора.
4. Методика контроля дезинфекции (не позднее 30-45 минут после дезинфекции):
5. Всю внутреннюю поверхность чашки протереть тампоном, смоченным раствором тиосульфата натрия;
6. Тампон опустить в среду Кесслера, которую поставить в термостат при 37оС на одни сутки;
7. Сделать высев со среды Кесслера на среду Эндо петлёй и выдержать среду в термостате при 37оС - 48 часов;
8. Подозрительные колонии (красного и розового цвета гладкой формы), содержащие грамотрицательные палочки, пересеять на ГПС;
9. После суточной инкубации при 43оС учесть образование кислоты и газа;
10. Ответ об обнаружении кишечной палочки дают на основании характера роста на средах Кесслера и Эндо, грамотрицательной окраски бактерий, ферментации глюкозы с образованием кислоты и газа;
11. Заключение: дезинфекция считается качественной, если из смывов продезинфицированного объекта не выделена кишечная палочка.
Рекомендации по выполнению задания:
1. Ход выполнения: в первый день провести дезинфекцию, сделать смыв с продезинфицированных чашек и посеять смыв на среду Кесслера; на второй день - из среды Кесслера сделать высев на среду Эндо; на четвертый день - отобрать подозрительные колонии, сделать мазок и в случае обнаружения грамотрицательных палочек остаток колонии пересеять на полужидкую ГПС; на пятый день - учесть ферментацию глюкозы и сделать заключение.