Набор «ГРИПП» позволяет выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтипы Н5 и Н7 в материале от павших и больных животных и объектах окружающей среды. Материалом для исследования являются: помёт, мазки из клоаки и трахеи, внутренние органы (фрагменты трахеи и легких, селезенка, мозг), воду, смывы с яиц и белок яйца. Тест-система включает комплекты реагентов: для экстракции РНК, для получения кДНК на матрице РНК, для амплификации участков кДНК (проведения ПЦР) и детекции фрагментов амплификации в форматах электрофоретического анализа и гибридизационно-флуоресцентной детекции (FEP и FRT), а также содержит контрольные образцы.
Набор «АмплиСенс Influenza virus А H5N1-FL» позволяет выявлять РНК вируса гриппа А и идентифицировать субтип Н5N1 в материале от павших и больных животных и объектах окружающей среды. Материалом для исследования являются: помёт, мазки из клоаки и трахеи, внутренние органы (фрагменты трахеи и легких, селезенка, мозг) воду, смывы с яиц и белок яйца. Тест-система включает комплекты реагентов: для экстракции РНК, для получения кДНК на матрице РНК, для амплификации участков кДНК (проведения ПЦР) и детекции фрагментов амплификации в форматах гибридизационно-флуоресцентной детекции (FEP и FRT), а также содержит контрольные образцы.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза и бактериальной контаминации объемом 0,3 – 0,5 мл. Постановку реакции осуществляют согласно временному наставлению по применению набора для выявления антител к вирусу гриппа птиц (ВГП) иммуноферментным анализом (например, «Набор для выявления антител к вирусу гриппа птиц методом ИФА» пр-во НПП «АВИВАК»).
Учет результатов проводят на спектрофотометре при длине волны 492 нм (при использовании ОФД) или 450 нм (при использовании ТМБ).
Все этапы инкубации проводят в течение 30 мин. при температуре 20—30 0С.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
Выявление специфических антител к вирусу гриппа птиц в сыворотках крови птиц осуществляют в соответствии с наставлением по применению «Набора антигенов и сывороток для диагностики гриппа птиц в реакции торможения гемагглютинации (РТГА)» микрометодом.
Учет реакции проводят визуально после полного оседания эритроцитов в контрольных лунках (в виде «пуговки»). Титром антител в сыворотке считают наибольшее ее разведение, в котором полностью отсутствует агглютинация эритроцитов антигеном вируса гриппа.
Выявленные в ходе лабораторного исследования положительные пробы отправляют для выделения вируса и его идентификации в ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора.
6. Обеспечение требований биологической безопасности при проведении эпизоотологического мониторинга за гриппом птиц в природных условиях
Для обеспечения биологической безопасности работ при проведении эпизоотологического мониторинга в потенциальных природных очагах гриппа птиц необходимо учитывать следующее:
· в проведении обследования участвуют сотрудники противочумных учреждений, а также могут привлекаться сотрудники других медико-биологических организаций и Институтов, имеющих допуск к работе с ПБА I—II групп патогенности. Вспомогательный персонал (водители, стрелки и т.п.) допускается к работе после проведения инструктажа;
· весь состав отряда или экспедиции должен быть ознакомлен с требованиями биологической безопасности при работе с возбудителями природно-очаговых инфекций, циркулирующих на данной территории. Ответственным за соблюдение этих требований при проведении отлова диких животных и сбора полевого материала является руководитель (начальник) эпидемиологического отряда (экспедиции);
· любой материал считается потенциально опасным в отношении возможного содержания возбудителей природно-очаговых болезней, свойственных той ландшафтной зоне, в пределах которой он собран;
· рекогносцировочное обследование местности, установку орудий лова осуществляют в специальной одежде (комбинезон или противоэнцефалитный костюм, сапоги);
· проверку выставленных орудий лова и сбор полевого материала проводят в рабочей одежде, дополненной фартуками и нарукавниками из водонепроницаемой ткани (пленки), резиновыми перчатками (2 пары) [по окончании работ фартуки, нарукавники и перчатки дезинфицируют];
· для защиты органов дыхания используют одноразовые ватно-марлевые повязки или противопылевые респираторы (предпочтение отдается респираторам «Лепесток» или респираторам класса не ниже FFP2);
· защиту органов зрения осуществляют плотно прилегающими очками;
· дезинфекцию орудий лова и других инструментов проводят ежедневно по окончании работы путем прогревания на солнце (в летнее время), кипячения, обработки дезинфицирующими растворами с последующим проветриванием, ящики и отсадники обрабатываются дезинфицирующими растворами;
· разбор полевого материала, вскрытие животных проводят в противочумном костюме I типа (защита органов дыхания аналогична п.6 настоящего раздела, особенности забора материала и подготовки проб для транспортировки в лабораторию изложены в разделе 4.4. «Сбор полевого материала для лабораторного исследования»);
· по окончании работ, приведенных в п. 9, инструменты и защитную одежду дезинфицируют (см. приложение 4), использованные наконечники, пипетки обеззараживают погружением в 6 %—й раствор перекиси водорода на 60 мин, дозаторы обеззараживают двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6 %—м раствором перекиси водорода (экспозиция 120 мин);
· остатки полевого материала, не подлежащего лабораторному исследованию, сжигают или обеззараживают автоклавированием, образовавшиеся отходы помещают в вырываемые ямы, которые закапывают;
· транспортировку материала в диагностическую лабораторию осуществляют транспортом экспедиции;
· участники экспедиции подвергаются ежедневной термометрии, по окончании работ устанавливается обсервация сроком 7 дней;
· аптечка экстренной профилактики должна быть укомплектована в соответствии с СП 1.3.1285—03 и дополнена двумя из следующих противовирусных препаратов: арбидол, ремантадин, альгирем, озельтамивир, занамивир.
7. Обеспечение биологической безопасности при проведении лабораторных диагностических исследований
7.1.* Проведение работ, не связанных с накоплением вируса, образованием аэрозолей инфицированного материала (окраска мазков, постановка серологических реакций с необеззараженным, диагностическим материалом, серологические исследования с необеззараженным материалом, выделение РНК) осуществляют в противочумном костюме IV типа, дополненном ватно-марлевой повязкой (респиратором) и двумя парами резиновых перчаток. Работы проводят в боксе биологической безопасности II класса.
7.2.* Проведение работ по заражению культур клеток или куриных эмбрионов, а также связанных с возможностью образования аэрозоля осуществляют в боксах безопасности III класса. Работы проводят в противочумном костюме IV типа, ватно-марлевой повязкой (респиратором) и двумя парами резиновых перчаток.
Примечание.* При отсутствии боксов биологической безопасности работы проводят в противочумном костюме I типа, дополненном водонепроницаемым фартуком и второй парой перчаток.
7.3. Работа с инактивированным материалом, проведение реакции обратной транскрипции и ПЦР, электрофоретической детекции результатов исследования осуществляют в противочумном костюме IV типа дополненном резиновыми перчатками.
7.4. Перед началом работ персонал должен быть проинструктирован о порядке действий в случае возникновения аварий, включающих следующие сценарии: авария в боксе биологической безопасности; авария вне бокса биологической безопасности; авария с образованием аэрозоля.
7.5. Режимы обеззараживания различных объектов при лабораторной диагностике вируса гриппа птиц проводится в соответствии с СП 1.3.1285—03:
7.5.1. Обеззараживание поверхностей помещения (пол, стены, двери), оборудования, рабочих столов и др. — двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6% раствором перекиси водорода или 3% раствором хлорамина (экспозиция 120 мин) с последующей обработкой УФ в течение 30 мин.
7.5.2. Обеззараживание защитной одежды осуществляют:
а) кипячением в 2% растворе соды в течение 30 мин с момента закипания;
б) замачиванием на 30 мин при 50 0С в 3% растворе перекиси водорода с добавлением 0,5% моющего средства.
7.5.3. Обеззараживание перчаток — замачиванием на 60 мин в 6% растворе перекиси водорода с добавлением 0,5% моющего средства или в 3% растворе хлорамина.
7.5.4. Обеззараживание лабораторной посуды, автоклавируемых дозаторов, наконечников, вируссодержащих жидкостей, агарозного геля, инструментария из металла проводится методом автоклавирования — давление 2,0 кГс/см2 (0,2 МПа), температура 132±2 0С, время 45 мин.
7.5.5. Обеззараживание дозаторов — двукратным протиранием с интервалом 15 мин 6% раствором перекиси водорода (экспозиция 120 мин), с последующей обработкой УФ в течение 30 мин.
7.6. Аптечка экстренной профилактики должна быть укомплектована в соответствии с СП 1.3.1285—03 и дополнена двумя из следующих противовирусных препаратов: арбидол, ремантадин, альгирем, озельтамивир, занамивир.
8. Нормативные ссылки
Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан. — М., 1993.
Закон Российской Федерации "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" № 52 ФЗ от 30.03.99