В процессе эпизоотологического обследования осуществляются наблюдения за погодными условиями, фенологическими явлениями, проводятся учеты птиц, характера их размещения, численности и активности. Необходимо выявлять и отслеживать сроки, длительность и трассы их массовых сезонных перелетов и кормовых кочевок. При поиске очагов гриппа птиц обращают внимание на внешние признаки эпизоотии у диких птиц, особенно отмечая резкое снижение численности и активности пернатых, изменения в их поведении на водоемах, появление вялых особей, взъерошенности перьев, малоподвижность и др. Учитывая высокую чувствительность птенцов к вирусу гриппа, следует учитывать, что находки больных особей наиболее вероятны в выводковый период.
Основными объектами при сборе проб для лабораторного анализа являются водоплавающие и околоводные птицы: гуси, лебеди, утки, кулики, чайки и крачки, цапли и пастушковые. Для получения полной информации следует добывать и других птиц, обитающих на водоемах, включая дневных хищников и воробьиных. Обязательно исследование птиц синантропных видов: голубей, сорок, ворон и воробьев. Все павшие птицы, обнаруженные на водоеме, обязательно являются объектами сбора и лабораторного анализа. Необходимо отлавливать также мелких млекопитающих, обитающих по берегам водоемов: водяную полевку, ондатру, землероек и др.
Сроки и продолжительность экспедиционных полевых работ определяются погодным режимом, фенологическими явлениями года, особенностями экологии птиц. Оптимальными сроками для сбора материала при изучении гриппа птиц следует считать периоды массовых сезонных миграций перелетных птиц весной и осенью (апрель, сентябрь), а также гнездовой и выводковый периоды от появления птенцов до их подъема на крыло (май-июль).
На предварительном этапе перед выездом в поле осуществляется изучение картографических материалов, приобретаются топографические, гидрографические, геоботанические или ландшафтные карты и схемы масштабов 1:25000 -1:200000. На основании этих документов составляются календарно-территорнальные планы и графики работы, намечаются места стоянок и маршруты движения зоологических групп.
Эпизоотологическое обследование осуществляется путем последовательного радиального объезда территории. Маршруты, последовательность переездов, места, количество и длительность стоянок определяются в зависимости от обстановки, характера местности, условий работы, удобства подъездов и транспортировки собранных проб в лабораторию.
В обязанности экспедиционной группы вменяется также наблюдение за населением: его численностью, хозяйственной деятельностью и характером пребывания на водоемах. Особое внимание обращается на перемещение сельскохозяйственных рабочих, охотников, рыбаков, туристов и отдыхающих в период возможных обострений обстановки по гриппу птиц. Необходимо проводить активную разъяснительную и санитарно-просветительную работу среди местного и временного населения, тесно контактируя с представителями местных органов здравоохранения, власти, милиции, представителями ветеринарной службы.
Минимальный состав полевой группы: орнитолог и (или) зоолог, вирусолог, эпидемиолог, лаборант, водитель, повар. Все остальные нужды группы целесообразно обеспечивать за счет местного населения - отстрел и отлов.
При эпизоотологическом обследовании используют общепринятые зоологические и экологические методы, регламентированные действующими нормативными документами (Раздел 2; п. 2, 6).
Поиск возбудителя гриппа птиц должен проводиться, в первую очередь, в околоводных биотопах, расположенных как в местах концентрации и гнездования, так и вдоль внутри- и межконтинентальных трасс сезонных перелетов или кочевок птиц, относящихся, прежде всего, к отрядам гусеобразных, ржанкообразных, поганкообразных, веслоногих, голенастых, журавлеобразных, голубеобразных, куриных, воробьиных. При этом участки для сбора материала выбираются вблизи и (или) на территории населенных пунктов и мест рекреации, а также на территориях, где отмечался падеж птиц от гриппа и случаи заболевания людей. Здесь же подбирают и ключевые участки (пункты долговременного мониторинга - ПДМ), где исследования будут проводиться в течение нескольких сезонов. Каждый участок обследуют минимум 3 раза в год (в период весенних миграций, в гнездовой и послегнездовой периоды). По эпидпоказаниям проводят экстренные дополнительные эпизоотологические обследования.
5.4. Правила сбора, хранения и транспортировки материала для лабораторного исследования
Все работы по сбору, хранению и транспортировке полевого материала, подозрительного на содержание вируса гриппа птиц типа A (H5, H7), проводят в соответствии с действующими СП 1.2.036-95 и МУ 3.1.1027-01. Работу по сбору полевого материала проводят в сезонной защитной одежде, дополненной респиратором и резиновыми перчатками (Приложение 6 СП 1.3.1285-03).
Для лабораторного исследования из природных биотопов берут:
- птиц, птенцов;
- яйца птиц;
- фекалии птиц и (или) мазок из клоаки;
- мелких млекопитающих околоводных биотопов;
- воду и ил в местах гнездований.
Добытых птенцов, мелких птиц и млекопитающих (живых и агонирующих особей предварительно умерщвляют с помощью корнцанга) помещают в мешочки из плотной белой ткани (каждого животного в отдельный мешочек), края мешочков два раза подворачивают и туго завязывают. Используют мешочки рубцом наружу. Их снабжают этикетками с указанием даты, точного адреса, стации, вида животного, фамилии сборщика. Для транспортировки тканевые мешочки с тушками животных помещают в клеенчатый мешок.
У крупных птиц берут мазок из клоаки и отсекают голову с участком шеи. Голову помещают в отдельный клеенчатый мешок, который снабжают этикеткой.
Условия хранения. При температуре от 2 град. C до 8 град. C в течение суток, при необходимости длительного хранения животных вскрывают, органы и ткани замораживают при температуре ниже минус 40 град. C.
Условия транспортирования. Тушки животных и головы в течение суток при температуре от 2 град. C до 8 град. C. Органы в замороженном виде в сосуде Дьюара или термоконтейнере с сухим льдом.
Мазки из клоаки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После забора материала тампон (рабочую часть зонда) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида или фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают и ставят в штатив, который затем помещают в термоконтейнер с охлаждающими элементами.
Условия хранения. При температуре от 2 град. C до 8 град. C в течение 3 суток. При необходимости длительного хранения замораживают материал при температуре ниже минус 40 град. C.
Условия транспортирования. При температуре от 2 град. C до 8 град. C в течение 3 суток.
В замороженном виде - в сосуде Дьюара или термоконтейнере с сухим льдом.
Если птицу необходимо оставить живой (представители редких видов) берут мазки из клоаки.
Яйца птиц (не более 50% кладки) забирают из гнезда, маркируют и помещают в пластиковые емкости с углублениями для яиц, перекладывая ватой. Емкости помещают в металлический контейнер и доставляют в лабораторию.
Условия хранения. В течение 3 суток хранят при температуре от 2 град. C до 8 град. C. При необходимости длительного хранения содержимое яиц переносят в стерильные пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками и замораживают при температуре ниже минус 40 град. C.
Условия транспортирования. В течение нескольких часов после сбора - при температуре окружающей среды. В течение 3 суток при температуре от 2 град. C до 8 град. C. Содержимое яиц - в замороженном виде при температуре ниже минус 40 град. C в термоконтейнере с сухим льдом.
Фекалии птиц (4-5 г) собирают одноразовыми лопатками (шпателями) в стерильные пластиковые контейнеры (пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками).
Условия хранения. При температуре от 2 град. C до 8 град. C в течение 3 суток, при температуре минус 20 град. C - 30 дней.
Условия транспортирования. При температуре от 2 град. C до 8 град. C в течение 3 суток. Замороженный материал - в термоконтейнере с охлаждающими элементами при температуре минус 20 град. C.
Воду и ил собирают в местах гнездовий в прибрежной зоне. Ил (5-10 г) собирают черпаками и переносят в стерильные пластиковые флаконы с завинчивающимися крышками. Воду в объеме 1,0 л собирают в стерильные пластмассовые бутылки с завинчивающимися крышками. Контейнеры и бутылки маркируют и помещают в металлический контейнер с поглощающим материалом, количество которого должно быть достаточным для адсорбции содержимого в случае нарушения целостности транспортной тары.
Условия хранения. При температуре от 2 град. C до 8 град. C.
Условия транспортирования. При температуре от 2 град. C до 8 град. C.
При заборе проб органов используют стерильный хирургический инструмент (ножницы, скальпели, пинцеты), посуду.
Внутренние органы (фрагменты трахеи, легких, селезенки, мозга, синусы, воздухоносные мешки, кишечник) от забитой или павшей птицы, птенцов, а также мелких млекопитающих получают при вскрытии животных. Перед вскрытием тушку погружают в дезинфицирующий раствор (5% хлорамин Б) на 20-30 сек. При взятии проб органов животных место будущего разреза обрабатывают 5%-ным раствором йода или 70%-ным раствором этилового спирта и стерильными инструментами разрезают кожу, мышцы брюшной стенки или кости черепа. Разрез стенки брюшной полости делают "фартуком", доводя боковые линии разреза по ребрам выше уровня сердца, и откидывают образовавшийся лоскут, чтобы обнажить внутренние органы. Перед взятием головного мозга срезают всю затылочную часть черепа. С помощью второго набора инструментов отсекают кусочки внутренних органов размером от небольшой горошины до лесного ореха, над пламенем горелки укладывают пробы в стерильные одноразовые пластиковые пробирки или контейнеры, герметично закрывают.