Определение ANA и ENA методом твердофазного ИФА
Тест-система для ИФА ANA (UBI MAGIWELL) - для скринингового анализа на антиядерные антитела обеспечивает полуколичественное определение широкого спектра антител к сорбированному в лунках комплексу различных клеточных ядерных антигенов: двухспиральной и одноцепочечной ДНК, гистонам, рибонуклеопротеинам (РНП), SS-A, SS-B, Sm и др.
Отличительной особенностью систем ИФА ENA- скрининг и ENA- профиль (CLARK LABORATORIES) является то, что на поверхности полистерольных лунок сорбированы предварительно высокоочищенные отдельные эксрагируемые ядерные антигены: SS-A, SS-B , Sm, Sm/РНП, Scl-70 и Jo-1. В скрининговом варианте - все 6 антигенов вместе, в профильном - каждый антиген в отдельной лунке. Таким образом, обычный алгоритм диагностики заключается в первичном анализе сыворотки на скрининговой системе и повторной постановке анализа положительных сывороток на тест-системе ENA - профиль для выявления антител к конкретным антигенам. В случае положительного теста на скрининговой ANA -системе и отрицательного результата в тест-системах ENA - необходимо тестирование сыворотки на тест-системах для изолированного определения антител к ДНК, гистонам и другим антигенам, отсутствующим в системах ENA.
В случае установленного диагноза и выявленным ранее аутоантителам - для мониторинга эффективности терапии используются тест -системы для количественного определения титра антител к отдельным антигенам.
В качестве альтернативы плашечным тест- системам можно использовать пробирочные ИФА тесты фирм "ROCHE" и "Sanofi".
Положительные результаты серологического тестирования на ANA и ENA могут наблюдаться у 1 - 5 % здоровых лиц, особенно в пожилом возрасте. Определенные лекарства, например такие, как р-аминосалициловая кислота, фенитион, изониазид, гидразин, прокаинамид и некоторые другие могут индуцировать образование антиядерных антител.
7. АУТОАНТИТЕЛА В ДИАГНОСТИКЕ СИСТЕМНЫХ ВАСКУЛИТОВ
Системные васкулиты – группа заболеваний, которые характеризуются хроническим воспалением и деструкцией стенок кровеносных сосудов. Этиологические факторы выполняющие тригерную роль включают: инфекционные агенты, медикаментозные препараты, опухолевую прогрессию, циркуляцию патологических белков и ЦИКов, аутоантитела. Вместе с тем, около половины всех случаев системных васкулитов не имеют явной этиологической обусловленности и расцениваются как «идиопатические». Важно помнить, что некоторые васкулиты со сходными клиническими проявлениями могут иметь существенно различный прогноз и требовать различных терапевтических подходов.
До сих пор, окончательно не отработаны классификационные схемы данной группы заболеваний. Последние классификации базируются на калибре преимущественно поражаемых сосудов и преобладающему в очаге деструкции типу клеточных элементов: нейтрофилов, моноцитов или лимфоцитов. Правда, это скорее отражает стадию процесса, нежели доминирующий патогенетический процесс.
Появление возможности определения аутоантител к нейтрофильным цитоплазматическим антигенам (ANCA) значительно улучшило диагностику этих заболеваний. Существуют два подкласса аутоантител к нейтрофилам человека: c-ANCA (цитоплазматические ANCA) и p-ANCA (перинуклеарные ANCA). Наиболее значимыми являются антитела к ферментам первичных гранул нейтрофилов: протеиназе-3 (PR3) и миелопероксидазе (МРО), соответственно. Определение спектра ANCA (PR3, MPO) позволяет проводить дифференциальную диагностику грануломатоза Вегенера и микроскопического полиартериита. Использование ANCA как показателя активности васкулита имеет определенные преимущества перед такими классическими показателями как СОЭ и СРБ, более адекватно отражая степень активности и эффективность проводимой терапии и независимо от присоединения инфекционных осложнений.
Таблица 8. Диагностическая значимость выявления различных противонейтрофильных (ANCA) –антител
| Вид антител | Заболевание |
| Анти-МРО ANCA | Васкулиты, микроскопический полиангиит, с.Черджа-Стросса, РА, СКВ |
| Анти-PR3 ANCA | Грануломатоз Вегенера |
| Анти-BPI ANCA | Хронические инфекционные болезни, болезнь Крона, язвенный колит |
| Анти-эластаза ANCA | Эмфизема, РА, воспалительные ревматические болезни |
| Анти-катепсин G ANCA | воспалительные ревматические болезни, СКВ, синдром Шегрена, синдром Фелти |
| Анти- лизоцим ANCA | Ревматоидный васкулит, воспалительные процессы в ЖКТ, язвенный колит |
| Анти-лактоферин ANCA | РА, язвенный колит, первичный склерозирующий холангит |
8. ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА АНТИФОСФОЛИПИДНОГО СИНДРОМА
Антитела к фосфолипидам представляют собой гетерогенную группу аутоантител против отрицательно заряженных фосфолипидов. Они обнаруживается, в первую очередь, в тесте, определяющем антитела против кардиолипина (АСА-тест), дают ложноположительные реакции в биологических тестах на сифилис и в антикоагулянтном тесте на волчанку. Все эти три теста обнаруживают схожие, но необязательно идентичные антитела. Таким образом, для того, чтобы идентифицировать антитела к фосфолипидам, иногда приходятся использовать все перечисленные тесты.
Из различных существующих методов анализа для определения антител к фосфолипидам наиболее чувствительным является твердофазный иммуноферментный метод определения антител к кардиолипину. Присутствие этих антител у пациентов помогает выявлять больных с риском венозного и/или артериального тромбоза, часто сопровождающегося тромбоцитопенией.
Термин антифосфолипидный синдром был предложен для обозначения группы заболеваний, сопровождающихся повышенным количеством аутоантител к фосфолипидам и подразделяется на первичный (не связанный с определенной аутоиммунной патологией) и вторичный, асоциированный с СКВ или другими аутоимунными болезнями.
Антифосфолипидный синдром наиболее часто проявляется у пациентов с системной красной волчанкой или у больных волчанко-подобными заболеваниями, где критерии системной красной волчанки не выполняются. Высокие уровни антител к кардиолипину наблюдаются при тромбозах, при потере плода, при тромбоцитопении и некоторых других заболеваниях. Низкие уровни антител к кардиолипиду были найдены при различных клинических нарушениях, не относящихся к антифосфолипидному синдрому. Поэтому низкие уровни этих антител имеют ограниченное диагностическое значение.
Антифосфолипидный синдром связан более четко с антителами к кардиолипину классов IgG и IgA, чем с антителами класса IgM. Однако, при лечении наибольшим образом изменяется уровень lgM-антител. Низкие уровни антител класса IgM можно наблюдать и при других аутоиммунных заболеваниях, таких как ревматоидные артриты, первичный синдром Шенгрена, системная волчанка, вызванная применением лекарств, болезнь Лайма и сифилис.
Тест-система ImmuLisa™ ACA-Screen EUSA является удобным инструментом для предварительного выявления тех пациентов, в крови которых содержатся АСА. Последующий анализ позитивных сывороток с помощью наборов ImmuUsa™ ACA-IgG, ImmuUsa™ ACA-lgA, ImmuUsa™ ACA'IgM позволяет определить индивидуальные изотипы этих аутоантител.
Таблица 9. Синдромы, связанные с АСА
| Синдром | % встречаемости |
| Периодический тромбоз вен | 28-71 |
| Частые выкидыши | 28- 64 |
| Поперечный миелит | 50 |
| Гемолитическая анемия | 38 |
| Тромбоцитопения | 27-33 |
| Окклюзии артерий | 25 -31 |
| Livedo Riticularis (мраморная кожа) | 25 |
| Легочная гипертензия | 20 - 40 |
| СКВ | 33-57 |
Как показали проведенные исследования у пациентов с антифосфолипидным синдромом огромное значение имеет наличие антител не только к кардиолипину (АСА), но и к фосфатидилсерину, последние могут обнаруживаться как совместно с АСА, так и отдельно.