Научно-методический центр пищевых инфекций методы частной бактериологии (стр. 42 из 55)
Фактор роста Х содержится в эритроцитах в виде термостабильной группы тетрапирролов, входящих в состав гематина и гемина (принимают участие в цитохромном транспорте электронов и синтезе каталазы и пероксидазы). Виды, нуждающиеся в Х-факторе, не способны синтезировать протопорфирин из d-аминолевулиновой кислоты, что используют для их идентификации (см. ниже), фактор роста V — термолабильный кофермент, включающий НАД (коэнзим I) или НАДФ (коэнзим II). Этот фактор — составная часть витаминов группы В, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях бактериальных клеток. V-фактор присутствует в некоторых продуктах (например, в дрожжах), а также синтезируется некоторыми бактериями (например, сарцинами, стафилококками, нейссериями и др.). Добавление в питательную среду НАД, НАДФ или никотинамидрибозида удовлетворяет потребность микроорганизма в V-факторе. Также рост гемофилов стимулирует посев вблизи колоний микроорганизмов, продуцирующих V-фактор. Потребность в его присутствии испытывает незначительное число видов, а Н. aprophilus не нуждается в обоих факторах.
Haemophilus influenzae (палочка Афанасьева-Пфейффера)
Основной патоген; вызывает респираторные и менингеальные инфекции, эндокардиты, абсцессы, артриты, поражения кожи, ногтей и глаз. Гемофильные бактерии первым выделил Кох в начале 80-х гг. XIX в. из конъюнктивального экссудата больного египетским конъюнктивитом. Позднее схожий микроорганизм выделили М.И. Афанасьев (1891) и Пфейффер (1892) из гнойного отделяемого и ткани легкого больного, умершего во время пандемии гриппа. Длительное время его считали возбудителем гриппа (influenza), что объясняет происхождение видового названия. Недавно методом ДНК-гибридизации была установлена идентичность возбудителей конъюнктивита и легочных поражений, а возбудитель конъюнктивита, ранее известный как Haemophilus aegyptius, систематизирован как Haemophilus influenzae биовар aegyptius.
Морфология
Haemophilus influenzae — небольшие (0,3-0,4´1-1,5 мкм) коккобациллы, склонные к плеоморфизму. Часть штаммов имеет полисахаридную капсулу. Клеточная стенка наружной мембраны содержит ЛПС (эндотоксин) и протеины; некоторые из них штаммоспецифичны и идентифицируются серологически, что иногда используют при эпидемиологических обследованиях. В зависимости от состояния популяции, на ША капсулосодержащие штаммы Haemophilus influenzae формируют слизистые М-колонии (сочные, сероватые, иризирующие [дающие радужную окраску] в проходящем свете), образованные мелкими палочками, либо блестящие S-колонии диаметром 3-4 мм (полупрозрачные, при окраске по Грaму капсулы выражены слабо или не выявляются). Некапсулированные штаммы на твердых средах формируют более мелкие зернистые R-колонии (с неровным краем, не иризируют, серовато-белого цвета). Образованы полиморфными палочками и нитевидными формами.
Культуральные свойства
Haemophilus influenzae — факультативный анаэроб, хорошо растущий на воздухе. Обязательное условие роста, характерное всех видов Haemophilus -присутствие в питательной среде свежей крови. Перед внесением в среду эритроциты разрушают (наиболее часто инкубируют при 80°С в течение 15 минут, что способствует высвобождению факторов и разрушению ферментов, инактивирующих V-фактор); самостоятельно лизировать эритроциты Haemophilus influenzae не способна. Оптимальные среды для роста – ША, агар Левинталя и среда с переваром Файлдса (пептический перевар эритроцитов). Кроме указанных факторов, для анаэробного роста микроорганизмы утилизируют и другие продукты, содержащиеся в эритроцитах, например, протопорфирин IX, пиридиннуклеотиды и др.
Рисунок 19. Принципиальная схема бактериологического выделения Haemophilus influenzae
Антигенная структура
Антигенная структура гемофильной палочки включает Аг двух типов — капсульные (5-30% всех штаммов) и соматические. Питтмэн (1931) предложил разделить все известные штаммы по структуре капсульных Аг на 6 серотипов (a-f); каждый из Аг представлен комплексом углеводов. Серодиагностику проводят в РА типоспецифическими политиповыми или монотиповыми сыворотками; возможна трансформация серотипов между штаммами.
Защитные AT к Аг капсулы усиливают поглощение бактерий фагоцитами и стимулируют бактериолиз в присутствии комплемента in vitro. Основную эпидемическую опасность представляет Haemophilus influenzae типа b; ее капсульный Аг состоит из полирибозы и полирибитолфосфата.
Некапсулированные штаммы неоднородны по антигенному набору; один из них — Аг М имеет белковую природу и существует у всех штаммов.
Н. pleuropneumoniae
Возбудитель плевропневмонии свиней. Выделяют также при артритах овец, абсцессах у быков. Клетки представляют собой очень короткие палочки с закругленными концами, чаще - парные коккобактерии, иногда образуют короткие цепочки и даже нитевидные формы. Грамотрицательные, некислотоустойчивые, неподвижные. Образуют капсулу.
Факультативный анаэроб. Температурный оптимум 37-38°С. Для роста на питательных средах обычно требуют наличия в них V-фактора. На оптимальных плотных питательных средах (сывороточно-дрожжевой агар) через 48 ч инкубирования формируют прозрачные серо-белые круглые колонии диаметром 1-2 мм, с ровными краями, гладкой поверхностью, средневыпуклые. Консистенция колоний мягкая, а при первичной изоляции часто бывает липкой. Колонии S-формы флюоресцируют в косопроходящем свете. На кровяном агаре большинство штаммов дает b-гемолиз, у ряда штаммов скрытая гемолитическая активность может быть выявлена в САМР-тесте. На средах без V-фактора растут в виде мелких сателлитных колоний вблизи культуры (колоний) бактерии-кормилки.
Доказано наличие 12 серологических вариантов (1—12).
Вид патогенен для свиней, морских свинок, белых мышей, кроликов.
Н. parasuis
Изолируют при полиартритах и полисерозитах свиней, нередко вместе с Mycoplasma hyorhinis, а также при пневмониях. Распространено носительство у клинически здоровых свиней. У поросят послеотъемного возраста вызывает гемофилезный полисерозит (болезнь Глессера).
Морфологически представляет собой мелкие тонкие палочки, коккобактерии, короткие нити. Грамотрицательные, некислотоустойчивые, неподвижные. Образуют капсулу.
Факультативный анаэроб. Для роста нуждается в V-факторе. Температурный оптимум 37-38°С. На простых питательных средах не растет. При первичной изоляции в атмосфере желательно создавать повышенную концентрацию СО2. На оптимальной плотной питательной среде (шоколадный агар) через 48-72 ч культивирования формирует мелкие (0,4—0,5 мм) колонии. На жидких питательных в средах с V-фактором рост сопровождается слабым равномерным помутнением среды. Доказано наличие четырех сероваров: А, В, С, D (Bakos et al., 1952).
H. paracuniculis
Выделен от кроликов с явлениями слизистого энтерита. Патогенность не установлена.
Клетки представляют коккобактерии и полиморфные палочки, редко нити. Капсула не обнаружена. Для роста на питательных средах требуется V-фактор. На шоколадном агаре образует круглые, гладкие, сероватые, непрозрачные колонии.
H. paragallinarum
Возбудитель коризы птиц. Обнаруживают в респираторном тракте здоровых птиц.
Клетки представляют коккобактерии, полиморфные палочки или нитевидные формы. Образует капсулу.
Лучше растет в атмосфере с повышенным содержанием СО2 (10%). На шоколадном агаре через 48 ч образует круглые, выпуклые, гладкие, сероватые, полупрозрачные диаметром до 1 мм колонии. Гемолитическими свойствами не обладает. Рост стимулируют добавлением сыворотки крови кур, требуются Х- и V-факторы. Подразделяется на четыре серовара: А, В, С — содержащие поверхностные термолабильные антигены (Hinz, 1962), и четвертый — термостабильный соматический антиген (Hinz,1980).
H. avium
Патогенные свойства не установлены. Среда обитания — верхние дыхательные пути птиц. Клетки в виде коккобактерии, полиморфных палочек, иногда нитей, имеют капсулу.
Для роста на питательных средах требуется V-фактор, не нуждается в повышенном содержании СО2, гемолитической активностью не обладает. На шоколадном агаре образует круглые, выпуклые, гладкие, серовато-белые колонии, но возможны зернистые, морщинистые. Колонии капсулообразуюших штаммов флюоресцируют.
H. somnus
Вид с неясным таксономическим положением. Возбудитель септицемии и тромбоэмболического менингоэнцефалита крупного рогатого скота; может поражать генитальные органы. Среда обитания — слизистые оболочки респираторного и генитального трактов крупного рогатого скота.
Короткие палочки или нити, грамотрицательные, некислотоустойчивые, капсулы большинство штаммов не образуют, неподвижны.
Температурный оптимум 37-38°С. Первичная изоляция микроорганизма требует повышенного содержания СО2 (10%). Потребности в Х- и V-факторах не доказаны. На плотных питательных средах через 24 ч образует круглые, гладкие колонии диаметром 0,2-0,6 мм. При более длительном инкубировании возможно появление выпуклого центра, плоской периферии и зернистости.