Научно-методический центр пищевых инфекций методы частной бактериологии (стр. 35 из 55)

Бубонная чума. При данной форме заболевания кардинальный признак — бубон (чаще подмышечный или паховый), ранний признак — ощущение сильной боли в месте будущего бубона (часто больной вынужден принимать неестественные позы). Увеличиваясь до 10 см в диаметре, бубон размягчается, может нагноиться и спонтанно дренироваться. В случае развития геморрагического некроза лимфатического узла и утраты барьерной функции в кровоток поступает большое количество бактерий, что ведет к вторичной чумной пневмонии и/или генерализованному чумному сепсису. Вторичная легочная чума (как осложнение) составляет 5-10% бубонных поражений и резко утяжеляет состояние больного; регистрируемый иногда (вследствие генерализации) вторичный чумной менингит, как правило, заканчивается смертью больного. Смертность без лечения при бубонной чуме достигает 75%.

Первично-легочная чума — молниеносная и чрезвычайно контагиозная форма чумы; распространяется воздушно-капельным путем и эпидемически наиболее опасна. Больной выделяет с мокротой большое число чумных микробов; при этом объем мокроты может достигать огромных количеств (целыми тазами). Смертность без лечения близка к 100%. Смерть наступает через 2-6 суток после первичного аэрогенного контакта с инфекцией.

Кишечная чума проявляется профузной диареей с обильным выделением крови и слизи, сильными болями в эпигастральной области; обычно заканчивается смертью больного.

Первично-септическая чума характеризуется многочисленными кровоизлияниями в коже и слизистых оболочках; в тяжелых случаях наблюдают массивные кровотечения из почек, кишечника и кровавую рвоту. Генерализация процесса возникает без предшествующих местных явлений, типичны исключительно быстрое диссеминирование возбудителя в организме, массивные интоксикация и бактериемия. Заболевание быстро заканчивается смертью больного.

Кишечный иерсиниоз. Сопутствующая регионарная лимфаденопатия имитирует приступ аппендицита. Диарея обусловлена действием термостабильного энтеротоксина, стимулирующего синтез гуанилатциклазы.

Реактивный артрит. Кишечная инфекция может трансформироваться в септицемию с поражением внутренних органов и тяжелыми артритами; поражения обычно возникают через 1-14 суток от начала болезни. Патогенез суставной патологии связан со способностью компонентов клеточной стенки взаимодействовать с молекулами II класса HLA, образуя суперантигены, что активирует Т-клетки и стимулирует их пролиферацию. Аналогичные механизмы лежат в основе реактивных артритов, вызываемых стафилококками.

Анкилозирующий спондилит. Способность Y.enterocolitica вызывать реактивные артриты рассматривается рядом авторов как основание считать их этиологическим агентом ряда форм анкилозирующего спондилита, тем более, что бактерии часто выделяют от подобных больных.

Псевдотуберкулез. Y. pseudotuberculosis вызывает энтероколиты. Однако более характерно воспаление брыжеечных лимфатических узлов в илеоцекальной области, часто не отличимое от аппендицита. Диссеминирование по кровеносным или лимфатическим сосудам наблюдают редко.

Лабораторная диагностика

Наиболее достоверный результат, подтверждающий диагноз, получают выделением иерсиний из патологического материала. Данные бактериологических исследований не менее важны для дифференциальной диагностики заболеваний, протекающих с лихорадкой, лимфаденопатиями и энтероколитами.

Рисунок 16. Схема бактериологического выделения возбудителя чумы

Исследуемый материал. У больного с подозрением на чуму исследуют отделяемое бубона (при бубонной форме), содержимое язвы или других кожных поражений (кожная форма), мокроту и слизь из зева (легочная форма), кровь (все формы), фекалии и СМЖ (при поражениях кишечника или мозговых оболочек). Материал следует получить до начала антибиотикотерапии. Выделение Y.pestis проводят по стандартной схеме (рис. 16).

Рисунок 17. Схема бактериологического выделения возбудителя иерсиниозов

Возбудитель кишечного иерсиниоза может быть выделен из крови (Y.enterocolitica) и из кала (Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica) по стандартной (рис. 17) и по оригинальной схеме, предложенной Д.А. Васильевым, Д.А. Померанцевым.

Схема бактериологического выделения и идентификации Yersinia enterocolitica. (Д.А. Васильев, Д.А. Померанцев).

Общие положения.

Иерсиниоз – острое инфекционное заболевание из группы зооантропонозов, характеризующееся полиморфностью клинического проявления, в первую очередь как пищевая инфекция людей с тенденцией к генерализации, септикопиемии, а также поражению различных органов и систем жизнедеятельности у людей и животных.

Иерсиниоз относится к числу широко распространенных в мире инфекций, что обусловленно выраженной адаптационной способностью возбудителя. Исследования последнего десятилетия позволили сформулировать заключение о повсеместном распространении данной инфекции в России.

Так как по международной классификации кишечный иерсиниоз входит в число четырех наиболее распространенных пищевых инфекций, опережая по некоторым показателям сальмонеллез, то основным путем заражения людей являются пищевые продукты, и в частности мясопродукты.

Материалы для исследования

В бактериологическую лабораторию направляют не менее 200 г исследуемого субстрата, упакованного в водонепроницаемую тару и желательно в первые 1-3 часа после отбора. Если время доставки образцов свыше указанного срока, то материал допускается направлять в замороженном виде в термосе со льдом.

Порядок исследования материала

Первый этап (24-48 часов). Изучаемый субстрат (не менее 25 г) измельчают и смешивают со средой накопления – солевой фосфатно-буферный раствор (0,85% NaCl, КН₂РО₄ – 0,45 г, Na₂НРО₄ –6,34г, Н₂О – 1000 мл) с 1% спиртовым раствором генцианвиолета, в соотношении 1:5 (1 часть продукта и 5 частей среды) встряхивают в течение 1 минуты и культивируют при +4°С 24 – 48 часов. Через указанные сроки (24 часа в первую очередь, с дальнейшим сохранением в холодильнике исследуемой суспензии) 1мл полученной бактериальной суспензии смешивают с 5 мл 0,5%-ного раствора КОН (приготовленного по следующей методике: готовят стерильный 40% раствор КОН, из него в пробирку, содержащую 7,9 мл 5% стерильного раствора NaCl, добавляют 0,1 мл) встряхивают и через минуту высевают на селективный агар. Параллельно на селективные среды высевают и со среды накопления, хранящейся в холодильнике, причем посев делают с верхней трети суспензии (но не с поверхности), не взбалтывая среду.

Второй этап. Рост на селективных средах (24-48 часов).

В качестве селективного агара используют несколько сред.

На агаре Эндо рост изучаемых иерсиний – колонии мелкие, гладкие, слегка прозрачные. К 36 часам, удается их детальнее рассмотреть.

Среда Серова дает хорошие результаты: к 36 - 48 часам – колонии интенсивно-красного цвета, матовые, шероховатые, центр выпуклый.

Однако недостаток данной селективной среды — достаточно сложный по структуре состав: глюкоза – 0,5 г, мочевина – 0,5г, молибденовокислый аммоний – 0,1 г, углекислый натрий безводный – 0,1 г, 30% водный стерильный раствор сухой желчи – 2 мл, 1,6% водный раствор краски конгорот – 0,9 мл, 1,0% водный раствор генцианвиолета – 0,1 мл, сухой питательный агар –4,5 г, дистиллированная вода – 100 мл.

Среда Иркутского НИИПЧИ (аналог БТС), она выпускается как коммерческая и имеет следующий состав: желчь медицинская 20 мл, раствор NaOH 4% – 10-12 капель, сухой питательный агар – 35 г, глюкоза –10 г. мочевина 5 г, 1,6% спиртовой раствор бромтимолового синего – 8 мл, дистиллированная вода 1000 мл. В случае трудностей с приобретением ее состав достаточно доступен и она легко готовится в лаборатории. К 1 литру воды добавляют сухой питательный агар, медицинскую желчь, автоклавируют 20 минут при 0,5 атм. После охлаждения до 80°С добавляют глюкозу, мочевину, индикатор бромтимоловый синий и все смешивают. Среда зеленоватого цвета, хранится неделю. Иерсинии, разлагая мочевину, изменяют цвет среды на сине-зеленый, а колонии будут синего цвета. Те микроорганизмы, что не разлагают мочевину, растут в виде желтых колоний. Через 24-48 часов культивирования при температуре 22°С проводят идентификацию выросших колоний. Преимущество среды в том, что выявляется уреазная активность.

Третий этап. Клонирование, выделение чистой культуры (от 48 часов), биохимическая идентификация выделенных штаммов.

Из выделенной по морфологии и окраске колонии берут бакмассу для мазка, окрашивают по Граму. Если при микроскопии наблюдают грамотрицательные, полиморфные палочки, с закругленными краями, без спор и капсул, одиночные, возможно кокковидные, реже овоидные, то оставшуюся бакмассу колонии переносят в МПБ, ресуспендируют, подращивают при 24-26°С и проводят идентификацию по биохимическим тестам.