Для выделения следует выбирать молодые, не поврежденные плодовые тела, так как они меньше инфецированы микроорганизмами. Выделение можно проводить в день сбора или хранить плодовые тела в течение двух-трех дней в холодильнике в полиэтиленовых мешочках.
Обработка плодовых тел.
Перед выделением плодовое тело следует осторожно очистить от прилипших растительных остатков, промыть в проточной и стерильной воде и положить на фильтровальную бумагу, чтобы оно обсохло. Промывать плодовые тела нужно быстро, чтобы они не напитались водой. Плодовое тело можно простерилизовать, обтирая 96-градусным спиртом или погружая на несколько секунд в 1%-ный раствор сулемы, 3%-ный раствор перекиси водорода, раствор формалина (1:300), после чего тщательно отмыть в воде и дать обсохнуть. Плодовое тело можно так же быстро обжечь над пламенем горелки.Выделение инокулюма.
Предварительно обработанная одним из описанных выше способов плодовое тело разламывают и переносят на спар кусочек “ткани” из середины стерильным скальпелем, ланцетом или копьем. Ни в коем случае не обжигать инокулюм в пламене горелки. Выделят инокулюм из разных частей плодового тела: шляпки, ножки,место перехода шляпки в ножку, гимениального слоя. При выборе участка ткани нужно исходить из размеров и строения плодового тела.
Выделение лучше производить из самой толстой части плодового тела.
Кусочки плодового тела помещают на питательную среду в чашки Петри, чашечки для тканевых культур или пробирки. Расход среды при посеве на чашки для тканевых культур (диаметр 5-7 см.) незначителен, в каждой такой чашке находится только один кусочек, что важно для предотвращения загрязнения. Кусочки плодового тела помещают сверху на спар или частично погружают в агаризованную среду.
Инокулюмдереворазрушающих рекомендуется выделять следующим образом (Punaren, 1967). Во влажную камеру помещают тщательно отмытые, разрезанные плодовые тела или же кусочки древесины, пронизанные мицелием гриба. Чашку с инокулюмом помещают в термостат при температуре 20-25 градусов С; при температуре 26-28 градусов С и выше скорость выделения может замедляться. Желательно чтобы относительная влажность воздуха была не ниже 80%, для чего в термостат можно поставить сосуд с водой.
Выделение культур обычно производят на плотную среду: суслоагар, солодовый агар, картофельно-глюкозный агар и т.д. Если выделение идет плохо или мицелий не переходит с инокулюма на поверхность среды, в состав последней следует добавить дрожжевой автолизат, отвары коры, хвои или листьев различных высших растений (обычно в количестве от 0.5 до 5%), экстраты из плодовых тел грибов. В чашках Петри вместе с колониями
базидиальных грибов могут расти колонии плесневых грибов, дрожжей, бактерий, что обычно легко заметить. В таких случаях предполагаемые колонии базидиомицетов нужно последовательно пересеять и избавиться от инфекций с помощью обычных методов микробиологической техники.
Но следует иметь в виду, что разные штаммы одного и того же вида могут значительно отличаться по скорости роста и требованию к питательной среде. По разному происходит выделение из плодовых тел неодинакового возраста.[9]Остальные методы, т.е. из базидиоспор, субстратов, миноризных окончаний корней в наших исследованиях малоэффективны.Условия необходимые для роста грибов.
Рост грибов происходит при определнных условиях: наличие источников питания – углерода, азота, водорода, неорганических соединений, содержащих калий, натрий, фосфор, магний, кальций, серу и железо; микроэлементов – марганца, цинка, молибдена, кобальта, меди, бора и др. стимуляторов роста, оптимальной температуры, степени аэрации, света и других факторов.
Все источники питания разделяются на природные (естественные) питательные субстраты и искусственные питательные среды, строго определенного состава, содержащие необходимые элементы в усвояемой форме.
Из естественных питательных субстратов используют зерно в натуральном виде, настоек или отваров (пивное сусло, кукурузный экстрат), добавляемых к искусственным питательным средам.
Питательные вещества могут усваиваться только при определенной кислотности питательной среды, т.к. проницаемость оболочек грибов клеток изменяется в зависимости от pH среды. Большинство грибов развиваются при pH среды 4.5-6.0. Реакция среды в процессе роста культуры грибов может значительно изменяться. Различают оптимальные условия pH среды для прорастания спор, для вегетативного развития мицелия, для спорообразования. Смещение pH возможно для одного и того же гриба как в сторону подкисления, так и в сторону подщелачивания в зависимости от источников питания (Наумов, 1937).
Не меньшее значение для роста грибов имеет температура их выращивания. Температурный оптимум – 22-25 градусов С.
Для хорошего развития мицелия гриба влажность воздуха в помещении должна поддерживаться в пределах 95-97%.
Грибы растут при определенных условиях освещения. Освещение при обрастании соломы мицелием не важно.Получение в культуре плодовых тел.
Получение в культуре нормально развитых плодовых тел является наиболее надежным способом правильного определения культуры, а для получения плодовых тел хорошо плодоносящей Pleurotus ostreatus обычно используют тот же субстрат, на котором сохраняется в лаборатории культура гриба – сусловый агар, малый агар и т.д.
Для вешенки может применяться среда Бэднона (Бэдкок, 1941,1943), состоящая из древесной муки с добавкой костной муки, картофельного крахмала, сахара и древесной золы. Богатый питательными веществами субстрат, способствующий хорошему вегетативному росту мицелия, не всегда является оптимальным для образования плодовых тел. В некоторых случаях появление плодоношения стимулирует перенос гриба на бедную среду. У Вешенки плодоношение стимулируется добавлением в питательную среду целлюлозы в виде фильтровальной бумаги или соломы.
Время появление плодовых тел различно в зависимости от вида и штамма гриба, условий выращивания и состояния культуры.
Свет является одним из наиболее важнейших условий для развития плодовых тел.
На первых стадия развития зачатков плодовых тел достаточно незначительного освещения, а для образования плодовых тел вешенки необходимо освещение 2000-8000 лк
в течение 14 часов. Температура, оптимальная для плодоношения часто не совпадает с оптимальной температурой для роста мицелия. Так максимум плодоношения у вешенки при температуре от 15 до 17 градусов С, а оптимум – 22 – 25 градусов С.
Аэрация и влажность влияют на образование и формирование плодовых тел. Снабжение культур свежим воздухом с 95-97 % относительной влажности благоприятно сказывается на развитии плодовых тел. При высоком содержании в среде CO2 наблюдается появление абортивных плодовых тел и задержка в развитии шляпки, изменяются ее размеры и появляются морфологические изменения. Если воздух не обновляется, то могут образовываться лишь зачатки плодовых тел. [14]
Выделяют два способа выращивания Вешенки обыкновенной:
экстенсивный и интенсивный.
Выращивание Вешенки обыкновенной экстенсивным способом.
Вешенка обыкновенная может произрастать на стволах многих лиственных деревьев, однако наилучшими субстратными растениями для нее является тополь, ива, граб, бук и дуб. Древесина должна быть здоровой, не пораженной другими грибами. Лучше всего использовать свежесрубленную древесину, содержащую достаточное количество воды, необходимой для развития гриба. Не следует брать стволы диаметром меньше 15 см., поскольку урожайность грибов на них будет низкой. Инокуляцию мицелием производят весной, когда в подвалах (без специального подогрева) поддерживается температура оптимальная для его развития. Перед инокуляцией мицелием стволы распиливают на бруски одинаковой длины (30-35 см.), следя за тем, чтобы не испачкать их почвой. После распиливание производят вакцинацию брусков. Затем их устанавливают в подвалах, вертикально друг от друга, инокулируя один конец мицелием. На этот конец, инокулированный конец следующего бруска, а его противоположный конец инокулируют. Высоту столба доводят до 2-2.5 м. Слой мицелия на брусках должен быть не менее 1 см. толщиной. На верхний брусок сверху помещают доску толщиной 5-6 см. На нее наносят слой соломы и слой почвы высотой15 – 20 см. Это способствует поддержанию влажности и постоянной температуры субстрата, хорошему росту мицелия. Через такую “покрышку” бруски получают достаточное количество воздуха. Относительная влажность воздуха должна быть выше 90%. Через 2-3 месяца мицелий хорошо развивается по всему бруску. [12]
Затем бруски пронизанные мицелием следует перенести для плодоношения на лесные поляны, приусадебные участки, где достаточно много влаги (но не грунтовой) и нет прямых солнечных лучей. Бруски вкапывают таким образом, чтобы их нижняя часть на несколько сантиметров была погружена в почву. Плодовые тела появляются через 1 – 3 недели после перенесения брусков.[11]
Плодоношение длится 3 – 5 лет. Наибольший урожай вешенка обыкновенная дает на первом году плодоношения. В последующие годы бруски особого ухода не требуют.
Таким образом экстенсивный способ культивирования вешенки обыкновенной прост, дешев, однако качество и количество урожая в большей мере зависит от факторов внешней среды, поэтомурегулировать этот процесс невозможно. Указанные недостатки устраняются при интенсивных способах выращивания. [16]Выращивание вешенки обыкновенной интенсивным способом.