АГТ — агглютинационный тест
АНТ — антиглобулиновый тест
Наличие и титр антител против К антигенов Е. coliО78:К80, О119:К69 и О137:К79 в молозиве был ниже, чем антитела против О антигенов в тех же самых пробах. Процент тест положительных молозивных образцов с К-антигенами составлял при исследовании агглютинационным методом от 53,33 да 75,00, а при исследовании антиглобулиновым методом от 53,33 до 88,24, тогда как асе образцы были тестированы положительно с Е. coliО антигенами. Анти-К активность антител в молоке имела частоту и титр ниже, чем активность в молозиве. Пробы молока не имели антител против всех трех К антигенов.
Иммуноглобулины в молозиво извлекаются селективной секрецией из сыворотки крови коров. Следовательно, специфичность антител в молозиве определяется специфичностью антител в сыворотке крови коров. Кроме того, уровень антител в сыворотке крови коров зависит от воздействия на иммунокомпетентные клетки специфических иммуногенов, то есть активность антител молозива коров является рефлекторным отражением специфичности антигена. Вероятно, если определенные серотипы Е. coliимеются во внешней среде (коровник, родильное отделение), коровы впоследствии продуцируют специфические антитела и передают их через молозиво телятам. Это имеет место в том случае, когда инвазивные вирулентные серотипы Е. coliвызывают антигенную стимуляцию иммунокомпетентных клеток большую, чем не вирулентные штаммы.
Высший средний титр колостральных антител анти-К антигена был установлен против штамма О137:К79. Идентификация антител в сыворотке молозива и в сыворотке крови телят против серотипов О78:К80 и О119:К69 в более низких титрах и низшей частоте может постулироваться их незначительной вирулентностью и инвазивностью или тем, что антитела обладают перекрестной реакцией и не специфичны для этих серотипов.
Результаты абсорбционного теста сыворотки молозива и сыворотки крови телят указывают на перекрестную абсорбцию антител против Е. coliК антигенов исследуемых серотипов. Перекрестная абсорбция была, особенно, очевидной с 2-мя типами В антигенов, так как абсорбция с 1 антигеном идентифицирует антитела против 2 антигенов (О78:К80 и О119:К69). Эти данные подтверждают значительную перекрестную реактивность антител к К-антигенам. Такая кросс-реактивность антител обеспечивает защиту неонатальных телят против инфекции с более чем 1 штаммом Е. coli. Следовательно, антитела с перекрестной активностью против К антигенов Е. coliв естественных условиях способствуют повышению резистентности неонатальных телят против различных штаммов Е. coli.
Активность антител против К антигенов в молозиве и сыворотке телят 1-2 дневного возраста была более низкой чем активность против О антигенов. Низкий титр К-антител в сыворотке неонатальных телят можно было предположить, так как незначительная частота и низкий титр К-антител был в молозиве коров. В кишечнике новорожденных телят иммуноглобулины абсорбируются не селективно. Антитела против Е. coliК антигенов в молозиве были резистентные против обработки 2-меркаптоэтанолом, как и антитела в сыворотке новорожденных телят. Эти результаты указывают, что антитела не являются макроглобулинами.
Различная концентрация антител (титр) в сыворотке новорожденных телят против К и О антигенов указывает, что кормление молозивом может стимулировать или подавлять синтез антител к определенным антигенам в одинаковой степени независимо от места их локализации в бактериальных клетках.
Молозиво от коров получали из хозяйств: «Кетросу» района Анений Ной и ОПХ «Колоница» района Криулень. Молозиво (100 мл) нагревали до 37° С и добавляли 4 мл разведенного (1:10) сычужного фермента. После отделения сыворотки (через 30-60 мин) проводили фильтрацию для освобождения от казеина. Бульонную культуру Е. coliтестировали для определения DL50 путем внутрибрюшинного заражения белых мышей. Эта доза составила 0,25 мл. Мышей заражали интраперитонально в дозе DL50 тест- микроорганизмами и через 2 ч после инъекции вводили 0,5 молозивной сыворотки в разведении 1:5-1:20 соответственно титру. Мыши были под наблюдением в течение 72 ч. в порядке дифференциации между «К» и «О» агглютинацией, суспензию готовили для тест агглютинации следующим образом: 1- живая; 2- гретая при 100°С; 3- гретая при 120°С 2 ч. В опытах использовали три серотипа Е. coli: О78:К80, 0119:К69, 0137:К79. Для протективного теста использовали 18-24 ч бульонную культуру Е. соli каждого из вышеназванных серотипов.
Агглютинация («О», «К») и протективный тест на белых мышах представлены в табл. 2.24. «К» антитела, содержащиеся в молозиве и обладающие протективной активностью для белых мышей, отличались, как по титру, так и по эффекту для разных серотипов и проб сывороток молозива. Тест агглютинация против микробной суспензии, приготовленной тремя различными методами, является убедительным доказательством характеризующим высокую специфичность реакции. Данные табл. 2.24 подтверждают, что содержащиеся в молозиве антитела-агглютинины против «К» антигена Е. соli обладают высокой протективной активностью. Молозиво, содержащее антитела-агглютинины против «О» антигена обеспечивает незначительную защиту. Пробы молозивной сыворотки, не содержащие агглютинины против «К» и «О» антигенов, не обладали протективной активностью. Следовательно, протективная эффективность проб сывороток молозива против серотипов Е. соli может быть установлена определением титра «К» антител.
Культура Е. соli была изолирована из крови яремной вены двух больных телят, один из которых погиб через 24 ч, а другой через 36 ч. Телятам скармливали молозиво и определяли массу тела, как у живых, так и у погибших. Из одиннадцати телят, девять получавших 400 мл молозива в первое кормление, погибали в течение двух недель. Исследованием штаммов Е. соli, изолированных от этих телят определили содержание «К» антител-агглютининов в пробах, используемого молозива. Изолированные штаммы Е. соli, выделённые из крови сердца и костного мозга при аутопсии принадлежали к серотипам О78:К80, О119:К69, О137:К79.
| Серотипы | Тест | Пробы молозивной сыворотки | ||
| I | II | III | ||
| О78:К80 | «К» агглютинация | - | 1:320 | - |
| «О» агглютинация | 1:80 | - | - | |
| Протективный | 7/10* | 5/10 | 8/10 | |
| О119:К69 | «К» агглютинация | 1:640 | - | 1:160 |
| «О» агглютинация | - | 1:80 | - | |
| Протективный | 5/10 | 8/10 | 6/10 | |
| О137:К79 | «К» агглютинация | 1:1280 | 1:160 | - |
| «О» агглютинация | - | - | - | |
| Протективный | 1/10 | 7/10 | 9/10 | |
* летальность мышей отмечали в числителе, а количество зараженных в знаменателе.
Исследованные пробы молозива различались как по титру, так и по содержанию «К» антител по отношению к исследуемым серотипам Е. соli. Так, например, проба молозива 1 не содержала «К» антител против серотипа О78:К80, проба II – против серотипа О119:К69, проба III – против серотипов О78:280; О137:К79.
Доказательством взаимосвязи между защитой телят молозивом и присутствием в том же самом молозиве антител- агглютининов против «К» антигенов, в частности, к исследуемым серотипам Е. соli подтверждается протективным действием молозива – как результат специфической активности.
Так как, «К» антитела-агглютинины в молозиве являются фактором, защищающим белых мышей против экспериментального колибактериоза, эффективность проб молозива против определенных серотипов Е. coliможно тестировать агглютинационным методом. Следовательно, энзоотия колибактериоза новорожденных телят объясняется дефицитом агглютининов против «К» антигена Е. coli. Молозиво, скармливаемое телятам, погибшим от энзоотического колибактериоза, не содержало антител агглютининов против «К» антигенов Е. coli, изолированных от павших телят.