Исследование сыворотки крови в РСК на сап проводят только у лошадей, положительно реагирующих на маллеин. Данный метод позволяет выделить животных с активным сапным процессом. Положительные показания только одной РСК при отрицательной реакции на маллеин не могут служить основанием для диагноза на сап.
В некоторых случаях прибегают к бактериологическому и гистологическому исследованиям, а также к биопробе на кошках или морских свинках.
Порядок исследования на сап лошадей. Лошади неблагополучного хозяйства делятся на четыре группы.
К первой группе относятся лошади с явной клинической картиной болезни ко второй с неясными клиническими признаками и положительной глазной реакцией, к третьей - без признаков, но с положительной глазной реакцией, к четвертой - все остальное конское поголовье.
Лошади первой группы немедленно уничтожаются. Вскрытие трупов лошадей, больных сапом, воспрещается. Вторая группа исследуется маллеином три раза в 1-й, 6-й и 15-16-й дни. При отрицательном результате офтальмореакции их относят к четвертой группе. В случае получения положительных или сомнительных результатов лошади уничтожаются.
Третью группу исследуют два раза по маллеину, а кровь по РСК. Лошади, давшие положительные результаты РСК и положительные или сомнительные офтальмо-маллеинизации уничтожаются.
Лошадей, давших давших сомнительный или отрицательный результат исследования крови, через 15 дней вторично исследуют по РСК. Лошади, давшие при вторичном исследовании положительный результат по РСК или двукратно сомнительный результат по РСК а также положительный результат на маллеин, подлежат уничтожению. Лошади, все время показывающие отрицательные результаты исследования крови и положительные при трехкратной глазной маллеинизации, зачисляются в группу маллеиновых лошадей. Под кожу им вводят 2 мл маллеина и на 9-15-й день исследуют кровь по РСК.
Лошади, давшие положительную РСК, признаются сапными и уничтожаются. Лошадей, давших положительные результаты глазной маллеинизации и отрицательные по РСК, зачисляют в группу маллеинщиков, а отрицательно реагирующих по обоим методам - в четвертую группу.
Жеребят от маток-маллеинщиков исследуют двукратно офтальмо-маллеинизациеи с промежутками в 5-6 дней, а кровь - по РСК и введением под кожу маллеина (2 мл). Жеребят, давших по всем видам исследований отрицательный результат, через один месяц повторно исследуют. В случае отрицательных результатов переводят в группу молодняка для изолированного выращивания.
Для аллергического исследования применяют маллеин. В практике используют глазной, подкожный и внутрикожный методы маллеинизации.
Глазная маллеинизация является основным методом диагностики сапа у лошадей, ослов, мулов и верблюдов. Маллеин вводят двукратно с промежутком 5-6 дней. Маллеинизацию проводят утром, при естественном освещении. Маллеин наносят стерильной пипеткой на конъюнктиву здорового глаза при оттянутом нижнем веке в количестве 3 - 4 капель Учитывают реакцию после первого введения маллеина через 3 - 6 - 9 и 24 ч. Реакцию признают положительной, если развивается гнойный конъюнктивит. В глазной щели скапливается гной, спускающийся в виде шнура из внутреннего угла глаза, или он находится только в конъюнктивальном мешке. Наряду с этим у некоторых лошадей наблюдают серозно-гнойное истечение из ноздри. Иногда положительная реакция наступает и в другом глазу.
При сомнительной реакции наблюдают гиперемию конъюнктивы, припухание век, слезотечение и незначительное скопление (капля) гноя в углу глаза.
При отсутствии реакции конъюнктива остается неизменной, иногда в первые 2 - 3 ч отмечают лишь слабое ее покраснение и небольшое слезотечение.
Животным, давшим сомнительную и отрицательную реакцию, маллеин вводят повторно через 5 - 6 дней в тот же глаз. Учет реакции проводят через 3 - 6 - 9 - 12 ч. В период маллеинизации животных держат на коновязи на короткой привязи или в конюшне, привязанными врастяжку, головой к проходу. Верблюдам глазную маллеинизацию проводят однократно. Глазная проба выявляет более 95 % больных сапом животных. У истощенных и ослабленных лошадей, а также с сильно прогрессирующим сапным процессом чувствительность к маллеину понижена.
Подкожную маллеинизацию проводят в тех случаях, когда нельзя применять офтальмопробу (болезни глаз), а также в случаях неясных показаний глазной маллеинизации. У лошадей предварительно измеряют температуру тела (утром, днем, вечером). Средняя температура не должна превышать 38,5 °С. Маллеин вводят подкожно в дозе 1 мл в области шеи. Температуру тела начинают измерять на другой день в 6 ч утра и продолжают через каждые 2 ч до 18-го ч, затем на 24-м и 36-м ч. Оценивают реакцию по показаниям температуры тела и интенсивности развития местной реакции.
Реакцию признают положительной, если температура тела поднимается до 40 °С и в течение 6 - 8 ч удерживается на этом уровне, а затем постепенно снижается до нормы. На месте введения маллеина имеется местная реакция (может быть и незначительная). Положительной реакцию считают также и в том случае, когда на месте введения маллеина развивается сильно выраженная, горячая, болезненная припухлость и температура тела поднимается выше 39,6 °С.
При сомнительном результате местная реакция выражена слабо, температура тела поднимается выше 39 °С, но не выше 39,6 °С, возможно отсутствие местной реакции, но температура тела поднимается выше 40 °С.
Подкожная проба считается отрицательной, если на месте введения маллеина воспалительная припухлость не образуется или возникает незначительная местная реакция, температура тела остается в пределах нормы или повышается, но не выше 39 °С. Подкожная проба выявляет до 95 % больных сапом животных, но по технике выполнения она довольно трудоемкая.
Внутрикожным методом исследуют полудиких табунных лошадей, так как другими методами исследовать их очень трудно. Маллеин в дозе 0,2 мл вводят внутрикожно в области шеи и реакцию учитывают через 48 ч. Положительная реакция характеризуется развитием на месте введения маллеина строго очерченной тестоватой консистенции, горячей, болезненной припухлости величиной 2 х 3,5 см или 14,5 х 25 см. Отобранных на экспорт лошадей исследуют дважды. Нереагирующим лошадям второй раз маллеин вводят через 48 ч, учет реакции проводят через 24 ч. Этот метод по диагностической ценности не уступает глазному методу.
Лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование отделяемого материала из язв, полости носа, пунктатов из лимфатических узлов и абсцессов; выделение чистой культуры при посевах патологического материала на питательные среды, содержащие картофель, агар и бульон с 3 % глицерина; заражение исследуемым материалом или выделенной культурой самцов гвинейских свинок внутрибрюшинно, серых мышей или кошек - под кожу затылка; реакцию связывания комплемента с учетом нарастания титра антител; кожно-аллергическую пробу с малеином - внутрикожно или накожно (на скарифицированную кожу предплечья) вводят 0,1 мл малеина в разведении 1 : 100- 1 : 1000. Учет реакции проводится через 24-48 ч. Проба становится положительной с 10-15-го дня болезни.
Клинический осмотр.
При клиническом осмотре обращают внимание на состояние кожного покрова, поверхностных лимфатических узлов и сосудов, слизистой оболочки носовой полости, общее состояние здоровья животного. При носовом сапе на слизистой оболочке носовой полости появляются мелкие желтоватые узелки, окруженные красным ободком. На их месте образуются характерные язвы и звездчатые рубцы. Развитие язв сопровождается гнойным истечением из носа, иногда с примесью крови, а также припуханием подчелюстных лимфатических узлов. При сапных поверхностных поражениях кожи наблюдают пустулу, язву с гнойным содержанием или заполненную грануляционнной тканью, или рубец. При глубоких поражениях в толще кожи обнаруживают плотные узлы с гнойно-некротическим содержанием на разрезе, язвы или рубцы, которые могут быть расположены по ходу лимфатических сосудов. При поражении легких наблюдается слабый глухой кашель, быстрая утомляемость животного, периодические подъемы температуры тела выше 38,5 гр.С.
Аллергическое исследование.
Для аллергического исследования на сап применяют маллеин, представляющий собой стерильный культуральный фильтрат возбудителя сапа, выращенного на жидкой питательной среде.
При диагностике болезни применяют двукратную глазную и подкожную маллеиновые пробы.
Глазная маллеиновая проба.
Перед проведением исследования лошади (ослы, мулы) должны быть в течение суток освобождены от физической нагрузки и содержаться на привязи. Обследование животных, имеющих конъюнктивиты и другие заболевания глаз, глазной пробой не проводят. Обследуемым животным наносят 3-4 капли маллеина с помощью глазной пипетки на конъюнктиву одного глаза при оттянутом нижнем веке. Реакцию учитывают через 3,6,9,12, и 24 часа путем осмотра слизистой оболочки глаза. Положительная реакция характеризуется длительной или кратковременной гиперемией и опуханием конъюнктивы разной степени с гнойным истечением из внутреннего угла глаза, или скоплением гноя в конъюнктивальном мешке.
Реакцию считают отрицательной при отсутствии каких-либо изменений, или при слабом покраснении конъюнктивы и слезотечении. Животным, не реагировавшим на первую аппликацию аллергена, препарат через 5-6 сут. наносят повторно в той же дозе на конъюнктиву того же глаза.
Подкожная маллеиновая проба.