Структурный гомеостаз не лактирующей молочной железы (стр. 2 из 3)

После прекращения образования овариальных гормонов с наступлением климактерического периода молочная железа претерпевает инволюцию по одному из двух типов: жировому (чаще) или фиброзному. На фоне жировой инволюции диагностика малых начальных изменений в молочной железе не представляет труда. Трактовка изменений на плотном фоне фиброзной инволюции сложнее, поскольку её структура неоднородна за счёт чередования фиброзных и жировыхучастков.

2. Материал и методы исследования

2.1 Материал исследования

Кусочки тканей молочной железы, размером 1×0,5 исследовались после фиксации в растворах формалина 10%. Материал, приготовленный из фиксированных структур, предварительно обезвоженный, был уплотнен путем пропитывания парафином. Материалом для микроскопического исследования строения стромальных компонентов молочной железы человека явились готовые микропрепараты молочной железы 20 человек. Гистологический препарат представлял собой тонкий срез, произведенный на специальном приборе-микротом. Процесс изготовления гистологического препарата для световой микроскопии включал следующие основные этапы:

1) взятие материала и его фиксация;

2) уплотнение материала;

3) приготовление срезов;

4) окрашивание срезов гемотоксилин –эозином.

Фиксация обеспечивает предотвращение процессов разложения, что способствует сохранению целостности структур. Это достигается тем, что взятый из органа маленький образец либо погружают в фиксатор (спирт, формалин, растворы солей тяжелых металлов, осмиевая кислота, специальные фиксирующие смеси), либо подвергают термической обработке. Под действием фиксатора в тканях и органах происходят сложные физико-химические изменения. Наиболее существенным из них является процесс необратимой коагуляции белков, вследствие которого жизнедеятельность прекращается, а структуры становятся мертвыми, фиксированными. Фиксация приводит к уплотнению и уменьшению объема кусочков, а также к улучшению последующей окраски клеток и тканей. Уплотнение кусочков, необходимое для приготовления срезов, производится путем пропитывания предварительно обезвоженного материала парафином, целлоидином, органическими смолами. Более быстрое уплотнение достигается применением метода замораживания кусочков, например в жидкой углекислоте. Приготовление срезов производилось на специальных приборах- микротомах. Затем готовые срезы окрашиваются гематоксилином и эозином.

2.2 Методы исследования

Морфометрия это важное условие для возможности проведения анализа и сравнения полученных результатов; она включала в себя гистостереометрию с помощью морфометрической сетки Автандилова и измерения структур при помощи морфометрической линейки, встроенной в окуляр микроскопа.

Учитываются следующие элементы:

- Высота эпителия;

- Ширина мышечного слоя артерий и вен;

- Ширина просвета вен и артерий;

- Диаметр вен и артерий;

- Объем волокон, клеток и аморфного вещества в строме молочной железы;

Гистостереометрия с помощью морфометрической сетки основывается на определении удельного объема (в процентах) различных компонентов, выявляемых по количеству совпавших точек на морфометрической сетке Автандилова, вмонтированной в окуляр светового микроскопа. Начальное поле зрения с 25 равноудалёнными точками устанавливается по краю собственного и считают количество совпадений точек с конкретными компонентами ткани и рассчитывают их удельный процент в общей конструкции органа. При измерении удельного объема учитывались объем волокон, клеток и аморфного вещества в строме молочной железы.

Методами линейных измерений при прямом микроскопическом исследовании измерительной линейкой при 280 кратном увеличении микроскопа определяли высоту эпителия, ширину мышечного слоя вен и артерий, ширину просвета вен и артерий и диаметр вен и артерий.

В каждом препарате методом случайной выборки проводилось измерение каждого параметра 10 раз.

Выборочное среднее является той точкой, сумма отклонений всех рассматриваемых наблюдений от которой равна 0. Формула для выборочного среднего имеет вид:

.

Стандартное отклонение отражает вариабельность в значениях данных и равно корню квадратному из выборочной дисперсии.

Стандартная ошибка среднего – отражает точность выборочного среднего.

Увеличение объема выборки приводит к снижению стандартной ошибки, что может увеличить точность исследования. Формула для её вычисления выглядит следующим образом:

.

Техника приготовления и окраски препаратов детально описана в руководствах по гистохимии Э.Пирсом (1962) и гистологической технике Г.А.Меркуловым (1969).

В целях объективизации, полученные цифровые данные обработаны методами вариационной статистики на электронной таблице MS EXEL-2010 и Biostat 2009. Вычислялись среднее арифметическое, стандартное отклонение и ошибка среднего, результат представлен в виде М ± d ; ( М- средние арифметическое; ± d - стандартное отклонение, m- ошибка средней).

3.Структурная характеристина нелактирующей молочной железы

С помощью морфометрической сетки Автандилова проводили гистостереометрию структурных компонентов молочной железы. Полученные результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 – удельные объемы структурных компонентов молочной железы

Измеряемые параметры	Удельный объем %	Стандартное отклонение	Стандартная ошибка
Клетки стромы	10,75	3,81	1,94
Волокна стромы	23,97	5,37	3,61
Аморфное вещество	21,96	15,34	3,21
Стенка млечного хода	29,37	8,15	4,07
Просвет млечного хода	13,95	4,1	2,05

Из полученных результатов видно, что наибольший удельный объем имеют млечные ходы. Волокон стромы и аморфного вещества примерно одинаковое количество, а клеток находящихся в аморфном веществе меньше всех.

Млечные ходы в железе выстланы цилиндрическим эпителием, который лежит на базальной мембране, и при расчете выявили, что его высота 15,93 мкм +/-0,05.

Методом линейных измерений с помощью морфометрической линейки, встроенной в окуляр микроскопа измеряли диаметр артерий и вен молочной железы, ширину их просветов и ширину мышечных оболочек.полученные данные отражаются в таблице 2.

Таблица 2 – Количественная характеристика артерий и вен молочной железы

Измеряемые параметры	Среднее арифметическое	стандартное отклонение	Стандартная ошибка
Диаметр артерии мкм	104,97	0,07	0,05
Ширина просвета артерии мкм	68,25	0,47	0,16
Ширина мышечной оболочки артерии мкм	16,36	0,04	0,02
Диаметр вены мкм	160,23	0,32	0,21
Ширина просвета вены мкм	146,25	0,58	0,27
Ширина мышечной оболочки вены мкм	4,99	0,05	0,02

Из полученных результатов видно, что диаметр, просвет и мышечная оболочка артерий почти в 2 раза меньше тех же характеристик вен молочной железы. А судя по толщине мышечных оболочек их можно отнести к мышечному типу.