Для транспортировки материала целесообразно использовать специальные транспортные системы со средой. Их выбор с учетом вида материала, цели исследования и технических возможностей осуществляет лаборатория. К. числу наиболее универсальных транспортных сред относятся среда Стюарта и среда Эймс.
Транспортная система со средой Стюарта Среда Стюарта представляет собой полужидкий, бедный питательными веществами субстрат для сохранения и транспортировки широкого спектра патогенных микроорганизмов, таких, как Neisseriagonorrhoeae, Haemophilusinfluenzae, Corynebacteriumdiphteriae, Trichomonasvaginalis, Streptococcussp., Salmonellasp., Shigellasp. и др. Наиболее требовательные микроорганизмы сохраняются в данной среде более суток, прочие -до нескольких дней.
Наличие в среде тиогликолата подавляет ферментативную активность бактерий, а отсутствие азота предотвращает их размножение.
Транспортная система со средой Кери Блейр
Представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для фекальных образцов. Глицерофосфат, являющийся метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichiacoli, Klebsiellapneumoniae, и др.), заменен неорганическим фосфатом, удален метиленовый синий, и рН среды поднята до 8,4.
Среда Кери Блейр позволяет сохранять большинство патогенов, включая требовательные микроорганизмы, такие, как Neisseriasp., Haemophilussp., Streptococcussp. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.
Транспортная система со средойЭймса
Представляет собой очередную модификацию базовой транспортной среды Стюарта, в которой глицерофосфат заменен неорганическим фосфатом, поскольку глицерофосфат является метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichiacoli, Klebsiellapneumoniae, ets.) и может поддерживать рост некоторых грамотрицательных микроорганизмов.
Метиленовый синий заменен на активированный уголь фармацевтического качества. В среду добавлены кальций и магний для поддержания проницаемости бактериальных клеток.
Эта среда способна более 3 дней поддерживать такие микроорганизмы, как Neisseriasp., Haemophilussp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., однако наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 часов.2 часов. При использовании транспортной системы со средой срок доставки пробы в лабораторию может быть продлен максимально до 72 часов.
Показания к проведению исследования: клиническая картина сепсиса; лихорадочные состояния неустановленной этиологии; пневмонии; подозрение на инфекционные заболевания: брюшной тиф и паратифы, сальмонеллезы, бруцеллез, возвратный тиф, лептоспирозы, малярия, эпидемический менингит, пневмококковые инфекции, пищевые токсикоинфекции (при наличии лихорадки), стафилококковые и стрептококковые инфекции, сибирская язва, туляремия, чума.
Количество независимо отбираемых проб крови и время их взятия определяется лечащим врачом (табл. 1). Как правило, должны исследоваться не менее 2—3 проб крови, каждая из которых взята путем отдельной венепункции. Это необходимо для дифференциации истинной бактериемии от случайной контаминации крови при венепункции. Вероятность загрязнения вследствие случайного прокола сальной или потовой железы составляет 3%.
Таблица 1. Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от клинической ситуации
| Клиническое состояние | Кол-вопроб | Примечание |
| Острый сепсис, менингит, менингококоцемия, остеомиелит, артрит, острая пневмония, пиелонефрит | 2 | из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда перед началом антибактериальной терапии |
| Лихорадка неясного генеза | 4 | сначала 2 пробы из разных кровеносных сосудов (двух участков сосуда), затем через 24—36 ч. еще 2 пробы |
| Эндокардит, вялотекущий сепсис:в период обострения при подостром или вялотекущем течении | 2 - 3(6) | из двух сосудов или двух участков кровеносного сосуда первые 1— 2 часа подъема температуры тела, до начала терапии сначала 3 пробы с интервалом 15 мин. и более. Если они отрицательны, на вторые сутки собирают еще 3 |
| Эндокардиты у пациентов:получающих антибактериальную терапию на фоне антибиотикотерапии | 6 | по 2 отдельные пробы в течение трех дней в течение 48 ч |
У больных, получающих антибактериальные препараты, пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата. При наличии лихорадки оптимальным является взятие крови на фоне повышения температуры тела (но не на пике температуры!).
Необходимое оснащение.
1. Шприцы одноразовые 20-граммовые (для детей 10-граммовые) с иглами для венепункции. Запрещается использовать шприцы со «стерильного стола» в перевязочной, проверять проходимость иглы, просасывая через нее воздух.
2. Флаконы с питательными средами: среда для аэробов и факультативных анаэробов + среда для облигатных анаэробов (например, двойная среда + среда СКС) или универсальная среда для аэробов и анаэробов. Предпочтительно использовать промышленно произведенные среды, разрешенные к применению. При использовании изготовленной в лаборатории среды СКС в качестве индикатора анаэробиоза в нее добавляют резазурин, который краснеет в присутствии кислорода. В случае покраснения более 20% верхней части столбика среду регенерируют прогреванием в течение 20 минут в кипящей водяной бане. Регенерацию можно провести лишь однократно. При отсутствии резазурина среду регенерируют перед посевом в обязательном порядке. Оптимальным средством отбора пробы венозной крови являются вакуумные двухфазные флаконы к аппарату Бактек (Bactec).
3. 70° этиловый спирт.
4. 2% или 5% настойка йода.
5. Венозный жгут.
6. Резиновые (латексные, виниловые) перчатки.
7. Спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории).
Взятие исследуемого материала.
Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики. Кровь берут у постели больного или в перевязочной (процедурной) и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного, венепункцию и взятие крови, второй, в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает горлышки флаконов и закрывает их.
Кровь для исследования получают путем венепункции.
Порядок обработки кожи и взятия крови следующий:
1. кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70° спиртом;
2. наносят 2-5% йодную настойку, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.;
3. после высыхания йодной настойки проводят венепункцию;
4. пальпировать сосуд в районе введения иглы после обработки кожи нельзя;
5. протирают кожу 70° спиртом.
У взрослых кровь берут в объеме 10-20 мл, у детей — в зависимости от возраста.
Сразу после взятия кровь засевают на питательные среды. Соотношение крови и среды должно быть 1/10—1/60 для устранения бактерицидного действия крови путем ее разведения. Техника посева зависит от вида используемых питательных сред.
При использовании сред лабораторного приготовления, расфасованных во флаконы с целлюлозными (ватными) пробками, посев проводят следующим образом:
· снимают иглу со шприца;
· над пламенем спиртовки открывают флакон;
· вносят половину крови из шприца во флакон;
· обжигают горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки;
· закрывают флакон пробкой;
· осторожно, чтобы не замочить пробку, перемешивают содержимое флакона круговыми движениями;
· вторую порцию крови из шприца вносят во второй флакон, повторяя указанные операции.
При использовании флаконов со средами промышленного изготовления во флаконах с резиновыми либо пластиковыми пробками:
· при наличии на флаконах защитных колпачков их удаляют (отгибают), не открывая при этом пробки;
· пробки флаконов обрабатывают 70% этиловым спиртом (использование йодной настойки определяется рекомендациями производителя сред);
· кровь в равных объемах вносят в «аэробную» и «анаэробную» питательные среды, проколов при этом пробки флаконов. Если предполагается проведение бактериоскопического исследования, дополнительно готовят препарат «толстая капля» и мазок.
Для приготовления мазка каплю крови диаметром 2—3 мм наносят на обезжиренное предметное стекло вблизи от торца. Перед каплей крови ставят под углом 45° одноразовый пластиковый шпатель для растяжки мазков или стекло со шлифованным краем и плавным движением равномерно распределяют материал по поверхности.
Для приготовления препарата «толстая капля» на стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм и распределяют ее с помощью иглы или пипетки в диск диаметром 10—15 мм. Толщина капли должна позволять видеть через нее газетный шрифт. Иногда мазок и препарат «толстая» капля готовят на одном стекле. Для этого на поверхность приготовленного как описано выше мазка до его высыхания наносят еще одну каплю крови. Она, как правило, сама растекается в правильный диск необходимой толщины.
Препараты высушивают («толстая капля» сохнет 2—3 часа) и доставляют в лабораторию в специальном планшете для хранения и транспортировки стекол с соблюдением необходимой осторожности. Посевы крови немедленно доставляют в лабораторию, оберегая от охлаждения.
Бактериологическая лаборатория при исследовании посевов крови выдает отрицательный ответ в случае, если рост микроорганизмов не обнаружен в течение 10 дней инкубации. В случае наличия у больного подозрения на внутрисосудистую инфекцию или бруцеллез возникает необходимость пролонгированной (до 1 месяца) инкубации посевов. Это должно быть особо отмечено в направлении. Рутинный посев крови не обеспечивает выявления ряда микроорганизмов.