Минимальное количество гипофизарного или фолликулярного гормона, способное вызвать реакцию течки у самок-мышей, называют мышиной единицей.
У лошадей с 30-го дня жеребости можно попытаться использовать метод, основанный на обнаруживании в крови гормона пролана. Между 3 и 42 днями жеребости этот метод иногда дает неточные результаты, так как в этот период содержание пролана в крови незначительно (350–750 м. е. в литре крови). С 42-го по 100-й день жеребости количество гормона пролана в крови сильно повышается (до 100 000–130 000 м. е.), а потому в этот период реакция наиболее точная – дает верные результаты почти в 10а% случаев. После же 3 месяцев жеребости количество гормона пролана сильно снижается.
С 3 месяцев жеребости и до родов определение жеребости производят на основании обнаруживания в моче жеребой кобылы огромного количества гормона фолликулина, исчисляемое в десятках и даже сотнях тысячах мышиных единиц в литре моче. Правда, гормон фолликулин обнаруживается и нежеребых и в начале жеребости кобыл, но количество его исчисляется только в нескольких тысячах мышиных единиц в литре мочи. Таким образом, по разнице в количестве гормона фолликулина можно судить о жеребости кобылы.
Микроскопия мазков из влагалищной слизи. Слизь берут с шейки матки (лучше с ее устья) стерильным плотным ватным тампоном с помощью корнцанга. Эти тампоном делают ровные мазки на сухом, обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают краской Гимза (на 1 мл дистиллированной воды 2–г капли краски) на протяжении 25–30 минут, тщательно смывают краску, высушивают и микроскопируют.
В мазках из слизи, взятой у жеребых кобыл, находят значительное количество клеток мерцательного эпителия, слизевые шары голубого цвета, единичные клетки плоского эпителия и иногда незначительное количество лейкоцитов.
В мазках из слизи, взятой у нежеребых кобыл, обнаруживают большое количество лейкоцитов и клеток плоского эпителия, единичные клетки мерцательного эпителия. Шаров из слизи нет. Слизь на мазке лежит ровным слоем.
Биологическое исследование крови и мочи. В период беременности в крови и моче кобыл накапливается довольно большое количество гонадотропных (фолликулостимулирующий гормон – ФСГ и лютеинизирующий гормон – ЛГ) и гонадальных (фолликулин) гормонов, стимулирующих функциональную деятельность половых органов.
Диагностика жеребости по результатам биологического исследования крови или мочи основана на выявлении количественного содержания в них названных гормонов. Этот метод диагностики отличается высокой точностью (95–100%), но, несмотря на это, при массовых исследованиях на жеребость он применяется редко из-за сложности и дороговизны его выполнения.
Для выявления гормонов в крови и моче жеребых кобыл существуют следующие способы: 1) Колла и Харта, 2) Фридмана и Шнейдера, 3) Цондека и Ашгейма.
При изучении функционального состояния яичников некоторые авторы заменяют лапаротомию осмотром яичника через фистулу брюшной стенки.
Для этой же цели предложена пересадка яичника в переднюю камеру глаза кастрированных крольчих. При удачной операции, с ослаблением воспалительной реакции, роговица просветляется (в первые дни послеоперационного периода она мутнеет), и за привившимся яичником очень просто и удобно вести наблюдение.
После введения испытуемой сыворотки в ушную вену крольчих в трансплантате можно видеть кровоизлияния, через три дня – увеличение фолликулов, а через пять дней – ясную лютеинизацию.
Реакция Цондека и Ашгейма. Сущность реакции – выявление фолликулина в моче ил крови беременных.
У жеребой кобылы в моче фолликулина в сотни раз больше, чем в крови, поэтому при постановке реакции используют мочу. Содержание фолликулина в моче увеличивается с течением жеребости: в первые три месяца колеблется в пределах 300–800 МЕ, с третьего месяца до выжеребки достигает 28 000–500 000 и даже 1 000 000 МЕ в 1 л мочи.
Эти данные указывают на целесообразность применения фолликулиновой реакции преимущественно после третьего месяца жеребости, а в более ранней стадии – исследование на пролан.
Техника реакции. Мочу пропускают через бумажный фильтр, подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (лакмус). Для освобождения от токсичных веществ к моче прибавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. Эфир сливают, а мочу оставляют стоять открытой до испарения остатков эфира (пока не останется слабый запах). Обработка эфиром повышает активность фолликулина.
Лабораторными животными служат овариоэктомированные белые мыши (кастраты), выдержанные в течение двух недель после операции и проверенные на отсутствие течки. Можно использовать инфантильных самок мышей; у каждой из них окрасить шерсть на условном месте и в течение трех дней два раза в день вводить под кожу:
к а с т р а т а м
1-й мыши – 0,3 цельной мочи
2-й » – 0,2 » »
3-й » – 0,1 » »
4-й » – 0,1 мочи, разбавленной
водой в 2 раза
инфантильным
1-й мыши – 0,2 цельной мочи
2-й » – 0,1 » »
3-й » – 0,1 » »
4-й » – 0,1 мочи, разбавленной
водой в 2 раза
Если есть основание предполагать более поздние сроки жеребости, когда фолликулина в моче много, можно всем мышам вводить мочу, разбавленную водой в 2–3 раза.
Через 100 часов после первой инъекции (лучше с 70–80-го часа) из влагалищной слизи каждой мыши три раза в день изготовляют мазки. Для получения материала и приготовления мазков употребляют платиновые петельки. Прокаленную на спиртовке петельку погружают в дистиллированную воду и вместе с захваченной ею каплей воды вводят во влагалище. Для извлечения слизи петли проводят по слизистой оболочке легким скоблящим движением. Той же петлей слизь размазывают на поверхности предметного стекла. На одно стекло можно нанести 3–ж мазков. Каждый мазок помечают восковым карандашом тем номером, которым обозначена мышь.
Мазок высушивают на воздухе, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или просматривают под микроскопом без окраски, в затемненном поле зрения. Наличие в мазке безъядерных клеток (чешуек), указывающих на появление течки, расценивается как положительный диагноз. В сомнительных случаях можно вскрыть 1–2 мыши. Диагноз подтверждается обнаружением матки, увеличенной под влиянием фолликулина.
Реакция Колла и Харта. Пролан появляется в крови кобыл через 30–40 дней после начала жеребости в количестве 144 МЕ* в литре (в среднем). К 40–50-му дню жеребости количество пролана достигает 26 тысяч, к 90-му дню – 30–40 тысяч МЕ. С 90-го дня содержание в крови пролана начинает уменьшаться.
Практически выявление пролана в сыворотке крови кобыл может быть осуществлено в период между 40–120 днями жеребости (с половины второго до пятого месяца).
Тестобъектом служат инфантильные мыши (весом 6–8 г) или крысы (весом 20–28 г).
Из вены кобылы, подлежащей исследованию, берут около 50 мл крови и ставят в прохладное место для отделения сыворотки. Последнюю вводят под кожу трем мышам или крысам в дозах (мл):
1-й мыши . . . . 0,5
2-й » . . . . 0,3
3-й » . . . . 0,1
1-й крысе . . . . 1,0
2-й » . . . . 0,5
3-й » . . . . 0,3
Всего делают шесть инъекций в течение трех суток (по две инъекции в сутки).
На 4–5-й день после начала инъекций от подопытных животных 2–3 раза в день готовят мазки из влагалищной слизи и исследуют под микроскопом. Если кобыла была жеребой, то под влиянием имеющегося в крови пролана у инфантильных мышей или крыс происходит половое созревание – развитие фолликулов. С созреванием фолликулов образующийся в них фолликулин вызывает течку, и мазок состоит из безъядерных клеток (чешуек). Если картина не ясна, через 100 часов после начала инъекции мышей убивают. При наличии у кобылы жеребости у мышей удается установить увеличение рогов матки, а в яичниках – зрелые фолликулы, желтые тела или фолликулы, заполненные кровью.
Решающее значение имеют изменения яичников и матки, поэтому для суждения о реакции всех или некоторых мышей убивают или вскрывают.
Реакция Фридмана и Шнейдера. Объектом служат крольчихи весом 900–1200 г, то есть достигшие половой зрелости. Самки должны содержаться изолировано от самцов, а еще лучше и от самок.
Десять миллилитров сыворотки крови исследуемой кобылы вводят в ушную вену крольчихи. Через 36–48 часов после инъекции у крольчихи производят лапаротомию и осмотр яичников. После инъекции сыворотки на месте разорвавшихся фолликулов или обнаруживают фолликулы, полость которых заполнена кровью.
После осмотра яичников рану брюшной стенки зашивают. Через 2–3 недели эту же крольчиху можно использовать вторично (иногда одно животное удается использовать 5–6 раз). При повторных инъекциях следует иметь в виду возможность анафилаксии.
К преимуществам этой реакции относится укорочение срока ее до 48 часов, вместо 100 часов при методике Колла и Харта.
Диагностика беременности овец и коз
Анатомия и топография половых органов овец и коз.
Половые органы овец и коз анатомически отличаются от таковых крупных жвачных только меньшими размерами. Длина преддверия 4–5 см, влагалища 8–12 см. Шейка матки, у ярок длиной 3–5 см, у взрослых маток 5–7 см, имеет 8 хорошо выраженных поперечных складок слизистой оболочки, увеличивающихся по направлению к влагалищу. Последняя складка вдается во влагалище, образуя зев матки, по форме напоминающий рот рыбы.
Тело матки длиной 2–4 см переходит в сильно извивающиеся и суживающиеся к верхушкам рога длиной от 10 до 20 см, в зависимости от возраста и породы животного. На слизистой оболочке рогов 88–110 карункулов с углублениями в центре. В роге – плодовместилище карункулов больше, чем в роге свободном (Ч. А. Рзаев).
Межроговой желоб хорошо выражен. Яйцепроводы извилисты, длиной от 9 до 18 см. Яичники овальной формы, длиной 0,5–1,0 , шириной а,3–0,5 см, в стадию возбуждения увеличиваются до 2,2*2 см.