При первичном серопозитивном, вторичном (свежем и рецидивном), раннем врожденном сифилисе обнаружение бледной трепонемы подтверждает клинический диагноз до получения положительного результата серологического исследования крови и позволяет немедленно приступить к лечению.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ КРОВИ
В распознавании трепонемной инфекции большое значение имеет серологическая диагностика. При активных формах сифилиса положительные серологические реакции подтверждают клинический диагноз, при скрытых формах болезни они выявляют латентную трепономную инфекцию. Их динамика в процессе лечения служит показателем эффективности терапии, а после завершения лечения является одним из важных критериев изле-ченности сифилиса.
Для серологической диагностики сифилиса применяются
— стандартные серологические реакции: а) реакция отклонения или связывания комплемента (Вассермана) с липоидными антигенами (органоэкстрактами, кардио-липиновым); б) осадочные реакции Капа и цитохолевая (Закса—Витебского).
Для получения более достоверных результатов разработана методика постановки реакции связывания комплемента на холоду (при температуре 4—8°С), что создает более оптимальные условия для абсорбции комплемента, и реакция Колмера, обеспечивающая более прочное соединение антигена с антителом. Для выяснения титра реагинов при положительных результатах ставится количественная реакция Вассермана с разведениями сыворотки крови 1:5, 1 : 10, 1 : 20, 1 :40, 1 :80, 1 :160 и 1 :320;
— реакция связывания комплемента (РСК) с трепонемным антигеном (озвученным или протеиновой фракцией) — чувствительная и высокоспецифическая;
— реакции иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) и иммунофлюоресценция (РИФ) в разведениях сыворотки 1 : 10 и 1 :200 —весьма специфические и чувствительные.
Реакцию иммобилизации бледных трепонем ставят различными методами: обычным, меланжерным (Н. М. Овчинников), упрощенным (У. М. Мирахмедоз), а также количественным (в разведениях от 1 : 10 до 1:4720). Она считается отрицательной, если подвижность теряют менее 20% трепонем, сомнительной — 21 — 30%, слабоположителыюй —31—50% и положительной — более 50%. При первичном сифилисе РИБТ обычно становится положительной позже стандартных серологических реакций, при вторичном — совпадает с их показателями. Ее ценность особенно велика при выявлении скрытого сифилиса, распознавании поражешн внутренних органов и нервной системы, при колеблющихся, нестойких результатах стандартных серологических реакций (то положительные, то отрицательные), при обследовании беременных, у которых подозревается наличие сифилиса. Эта реакция позволяет дифференцировать ложноположительные результаты от истинных, подтвердить диагноз у больных с поздними формами сифилиса с отрицательными стандартными серологическими реакциями.
РИБТ может оставаться положительной после окончания полноценного лечения, когда стандартные серологические реакции отрицательны, и поэтому результаты ее в качестве критерия для определения излеченности сифилиса не учитываются. Для этой цели, в известной мере, может служить количественная РИБТ, снижение титра которой является благоприятным показателем.
РИФ чувствительнее РИБТ, но чаще дает положительные неспецифичсские результаты. РИФ-10 имеет ориентировочное значение, а РИФ-200 — диагностическое. Последняя реакция часто становится положитетьной при первичном сифилисе раньше стандартных и в этом ее ценность для ранней диагностики сифилиса. При вторичном свежем и рецидивном сифилисе РИФ не имеет преимущества перед стандартными серологическими реакциями, а при скрытых, висцеральных формах болезни, при сифилисе нервной системы, так же как и РИБТ, позволяет уточнить диагноз; если результаты стандартных серологических реакций отрицательные, сомнительные или колеблются, РИФ не может служить критерием излеченности сифилиса, так как остается положительной и после проведения полноценной терапии. Ее результаты оцениваются так: 4 + , 3+, 2 + , 1+ и отрицательная.
Из числа наиболее чувствительных и специфичных модификаций РИФ следует отметить РИФ—АБС (испытуемую сыворотку адсорбируют взвесью культуры бледной трепонемы для удаления групповых антител), реакцию ингибиции и непрямой метод с участием комплемента;
— микрореакции на стекле (с плазмой, активной сывороткой или свежей каплей крови) — высокочувствительные, но чаще, чем другие серологические реакции, дают ложноположительные результаты. Поэтому они расцениваются как ориентировочные, отборочные и применяются обычно при массовых профилактических серологических обследованиях. При положительных результатах реакции пациенты подлежат тщательному клинико-серологическому обследованию с постановкой стандартных серологических реакций, РИБТ, РИФ. Техника постановки микрореакций проще, чем других серологических реакций, выполнение ее требует меньше времени, экономически они более выгодны и рекомендуются в практике массовых клинико-серологических обследований контингентов, подлежащих профосмотру.
Методика взятия крови для исследования и ее транспортировки в лабораторию. Кровь (5—6 мл) берут натощак пли не ранее чем через 5—6 часов после приема пищи из локтевой вены шприцем или одной иглой самотеком. Иглу и шприц после кипячения промывают стерильным физиологическим раствором.
Во избежание ложноположительных результатов серологических реакций не следует брать кровь, если больной накануне принимал жирную пищу, спиртные напитки, у лихорадящих больных ранее 12—14 дней после перенесенных инфекционных заболеваний, у женщин во время менструаций, за две недели до родов и спустя две недели. При запорах перед забором крови накануне следует сделать очистительную клизму. У детей кровь берут из черепной, яремной, локтевой вены или из надреза на пятке. Пробирку с кровью необходимо маркировать (приклеить этикетку с фамилией больного и датой взятия крови) или нумеровать специальным карандашом, а в прилагаемом списке указать фамилию пациента, в соответствии с номером пробирки, дату взятия крови на исследование, предварительный или окончательный диагноз.
Испытуемую кровь в пробирке, закрытой ватной пробкой, помещают в термостат на 30—40 мин при 37 С или оставляют в комнате на 2 ч, после чего образовавшийся сгусток отделяют тонкой стеклянной палочкой или тонкой проволокой, потом ее помещают до следующего утра в рефрижератор или холодильник.
Если нельзя произвести серологические исследования свежей сыворотки на месте, ее высушивают и пересылают в лабораторию для постановки серореакции. Для высушивания набирают шприцем или градуированной пипеткой 1 мл прозрачной сыворотки и наносят в двух местах по 0,5 мл на сложенную вдвое полоску целлофана, на которой заранее написана фамилия больного и дата взятия крови. После высыхания сыворотки бумагу складывают в виде пакетика, вкладывают в конверт и отправляют почтой в ближайшую серологическую лабораторию. Высушенные капли сыворотки вырезают и опускают в пробирку, затем заливают 1 мл физиологического раствора, инактивируют и ставят реакции.
Для постановки РИБТ кровь (5—6 мл) берут натощак после предварительного протирания кожи в области локтевой вены эфиром (не спиртом!), в абсолютно стерильных условиях, самотеком в стерильную, сухую пробирку, которую затем закрывают плотной ватно-мар-лсвой пробкой и помещают в термостат на 30—40 мин при 35°С. Сгусток крови отделяют от стенок пробирки прокаленной остуженной проволокой или длинной иглой, затем пробирки помещают в рефрижератор или холодильник (при 3—5°С). Во избежание ложноположительных результатов кровь не следует брать для исследования во время медикаментозной терапии. Исследование можно делать лишь после окончания инъекций препаратов висмута через 4 недели, дюрантного пенициллина — через 20 дней, водорастворимого его препарата или приема внутрь эритромнцина, тетрациклина — через 7— 10 дней, других медикаментов — через 7 дней. Если больному вводилась пенициллиназа, то взятие крови на РИБТ после лечения пенициллином может быть произведено раньше.
Стерильную сыворотку можно пересылать в плотно закупоренной пробирке в другие города, где ставится РИБТ (У. М. Мирахмедов, 1968).
Серологическая диагностика проводится комплексно. Ставятся РСК с липоидным, а по возможности и с трепонемным антигеном, при положительных результатах определяется титр реагинов, а также осадочные реакции. Показатели учитываются раздельно по каждой
реакции, сопоставляются между собой и с клинической картиной. При неясных данных ставится РИБТ, РИФ-10 и РИФ-200. Если эти реакции повторно положительны, даже при сомнительных или слабоположительных стандартах, их следует учитывать при диагностике сифилиса.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМАХ СИФИЛИСА
Серологические реакции при первичном сифилисе.
Реакция Вассермана (РВ) с липоидными антигенами (органоэкстрактами) становится положительной на 5— 6-й неделе после заражения у 25—60% больных, на 7—8-й неделе — у 75—96% и с 9—10-й недели —у 100°/,. Эти сроки могут быть несколько короче, в частности, у больных с биполярными шанкрами, а у пациентов, которым в инкубационном периоде сифилиса вводились небольшие дозы антибиотиков по поводу сопутствующих болезнен, этот срок удлиняется до двух и даже четырех месяцев.