Интервал между приготовлениями навесок или их разбавлений и высевом в питательные среды не должен превышать 30 мин.
Проведение анализа:
Метод определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно аэробных микроорганизмов.
Из разведений, приготовленных по предыдущему пункту, стерильной пипеткой отбирают 1 или 2 см³ исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения.
При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают, и посевной материал вносят на дно чашки.
В каждую чашку Петри не позднее чем через 15 мин добавляют 15-20 см³ (мясо-пептонного агара). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на (72±1)º С.
Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов.
Из разведений стерильной пипеткой отбирают по 1 или 2 см³ исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают, и посевной материал вносят на дно чашки. Пробу заливают 15-20 см ³ питательной среды (солодовый сусло-агар). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на 120 ч при температуре 24-30 º С.
Бактерии группы кишечных палочек и патогенных микроорганизмов определяют по методам, утвержденным органами государственного санитарно-эпидемиологического контроля.
Обработка результатов:
После термостатирования через 24 ч для мезофильных аэробных и факультативно аэробных микроорганизмов и через 72 ч для дрожжей и плесневых грибов проводят предварительный подсчет колоний.
Окончательный подсчет колонии проводят через (72±3)ч для мезофильных аэробных и факультативно аэробных микроорганизмов и через 120 ч для дрожжей и плесневых грибов.
При окончательном пересчете дрожжевых колоний допускается их микроскопировать.
Если колоний не много, количество определяют визуально; если много, то подсчет ведут на ¼ или 1/8 площади чашки при помощи лупы, делая затем пересчет на всю чашку и на количество засеянного сахара.
Колонии микроорганизмов подсчитывают в каждом из параллельных посевов одного разведения. По результатам подсчета вычисляют среднее арифметическое значение количества колоний во всех посевах одного разведения.
Если имеются колонии, выросшие не из одного , а из следующих друг за другом разведений, то подсчитывают количество микроорганизмов в сахаре по результатам подсчета колоний в каждом из этих разведений раздельно и вычисляют среднее арифметическое значение.
Количество микроорганизмов 1 г сахара (Х) вычисляют по формуле
Х = а*10/V
где:
а - среднее арифметическое значение количества микроорганизмов в одном разведении;
n- степень разведения продукта;
V-объем посевного материала, внесенного в чашку, см³
Полученные результаты округляют:
до числа, кратного 5 - если среднее арифметическое значение количества микроорганизмов менее 100;
до числа, кратного 20 - если среднее арифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5;
до числа, кратного 10 - если среднее арифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5.
Результат вычислений выражают числом – от 0,1 до 9,9 умноженным на 10, где n- соответствующая степень разведения продукта.
4.2 Метод определения сахарозы
Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы, реактивы - по ГОСТ 12571-98.
Проведение испытаний:
В нейзельберовой чашке взвешивают 26 г сахара с погрешностью ± 0,001 г, растворяют небольшими порциями теплой дистиллированной водой и с помощью воронки переводят в чистую сухую мерную колбу вместимостью 100см³. Сахар растворяют легким вращением колбы.
Затем в колбу добавляют дистиллированную воду (обязательно ополаскивая горловину колбы) в таком объеме, чтобы уровень раствора не достигал 20мм до метки.
Колбу с раствором помещают в термостат на 15 минут для достижения температуры (20,0±0,1)ºС.
Внутренние стенки горловины колбы до метки осушают фильтровальной бумагой. Пену, образовавшуюся на поверхности раствора, удаляют каплей этилового эфира. Раствор доводят дистиллированной водой до метки с помощью пипетки с тонким кончиком или шприца для инъекции. Колбу накрывают небольшим часовым стеклом и выдерживают в течение 30 минут, затем закрывают чистой сухой пробкой и содержимое ее тщательно перемешивают легким вращением.
При необходимости раствор фильтруют через двойной бумажный фильтр, покрывая фильтровальную воронку часовым стеклом во избежание испарения и изменения концентрации раствора. Первые 10 см³ фильтрата сливают. Фильтрование проводят при той же температуре, при которой проводят поляризацию.
Поляриметрическую кюветку ополаскивают отфильтрованным раствором и наполняют так, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Покровное стекло не должно сильно прижиматься головкой кюветы во избежание напряжения, которое может повлиять на оптическое вращение раствора.
Поляриметрическую кюветку с раствором помещают в камеру сахариметра и подключают к термостату, в котором поддерживается температура (20,0±0,1) ºС.
Проводят пять измерений с погрешностью, равной точности прибора, и вычисляют среднее арифметическое значение. При использовании поляриметрической кюветки длиной 100 мм среднее арифметическое значение отсчетов по шкале сахариметра удваивают.
При использовании автоматического поляриметра испытания проводят аналогично предыдущим указаниям с дополнительным проведением:
- взвешивания пустой мерной колбы с погрешностью ±0,001г;
- взвешивания мерной колбы с раствором сахара с погрешностью ±0,001г. после 30 минут выстаивания.
- снятие показания поляриметра при пустом отделении для поляриметрической кюветы;
- снятие показания поляриметра при установленной пустой чистой и сухой поляриметрической кюветы;
- определение температуры кварцевой пластины;
- снятия показаний поляриметра при установленной кварцевой пластине.
При использования автоматического поляриметра поляризацию определяют с учетом поправок на температуру и объем.
Поляризацию, скорректированную на температуру, Пt, ºZ («сахарных» градусов) вычисляют по формуле
где П- показатель поляриметра при установленной поляриметрической кювете с раствором , ºZ;
Y- показания поляриметра при установлении пустой(без раствора) поляриметрической кювете, ºZ;
Q- показания поляриметра при установленной кварцевой пластине, ºZ;
X- показания поляриметра при установленной кварцевой пластине, ºZ;
Q1- паспортные данные кварцевой пластины;
1,44*10- коэффициент;
tп- температура кварцевой пластины,
4.3 Методы определения редуцирующих веществ
4.3.1 Йодометрический метод определения редуцирующих веществ с применением реактива Мюллера
Сущность метода:
Метод основан на восстановлении ионов меди (Си²) из щелочного раствора Мюллера до гемиоксида мели (Си20) редуцирующими веществами при добавлении избыточного количества раствора Йода и титровании избытка его раствором тиосульфата натрия.
Аппаратура и реактивы:
По ГОСТ 12575-2001
Подготовка к испытанию:
Подготовка к испытанию
Приготовление раствора уксуснокислого свинца.
Растворяют 300 г 3-водпого уксуснокислого свинца (Рb(СН3СОО) 2-ЗН2О) в 800 см³ дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 см³, при необходимости устанавливают рН 7 раствором уксусной кислоты или гидроокиси натрия и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Приготовление раствора углекислого натрия (Na2СО3 ) массовой долей 14 % .Растворяют 140 г углекислого натрия дистиллированной водой в мерной колос вместимостью
1000 см ³и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Приготовление раствора уксусной кислоты молярной концентрации с(СН3СООН) = 5 моль/дм³
Разбавляют 300 см³ ледяной уксусной кислоты дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см³ и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Приготовление реактива Мюллера
Реактив Мюллера готовят смешиванием растворов А и Б.
Раствор А: 35.00 г 5-водной сернокислой меди (СиS04 5Н20) растворяют в 400 см³ кипящей дистиллированной воды.
Раствор Б: 173,00 г 4-водного виннокислого калия-натрия и 68 г безводного углекислого натрия растворяют в 500 см³ кипящей дистиллированной воды или 183,50 г 10-водного углекислого натрия растворяют в 400 см³ кипящей дистиллированной волы.
После растворения и охлаждения раствор Б приливают к раствору А в мерной колбе вместимостью 1000 см³ и доводят объем дистиллированной водой до метки.
В мерную колбу добавляют 3 г активного угля, взбалтывают и оставляют на 2 ч. Затем раствор фильтруют через фильтровальную бумагу.
В случае выпадения осадка окиси меди при длительном хранении раствор вновь фильтруют.
Раствор хранят в посуде из темного стекла с пришлифованной пробкой при комнатной температуре.
Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaОН) = 1 моль/дм³
Растворяют 40 г гидроокиси натрия дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1000 см³ и доводят объем дистиллированной водой до метки.
Приготовление раствора Йода молярной концентрации с(½12) = 0,0333 моль/дм³. Растворяют 4.30 г пересублимированного йода в водном растворе, содержащем 10 г йодистого калия (К1). Тщательно перемешивают до полного растворения йода и доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000см³. Поправочный коэффициент раствора йода устанавливают не реже 1 раза в 10 сут по раствору тиосульфата натрия в соответствии с требованиями ГОСТ 25794-2.Раствор хранят в посуде из темного стекла с прошлифованной пробкой при комнатной температуре.