3.9. Определение сульфитредуцирующих клостридий
1. Среда BiMedia 660A (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10).
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 43 - С на приборе "Bac Trac".
2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры: Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) 24 ч Масштаб измерений (Scale): М-параметр 0 - 50% Е-параметр 0 - 50% Время задержки (Delay) 1 ч Пороговые значения (Thresholds): М-параметр 5% Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) 23 ч. Определение сульфитредуцирующих клостридий необходимо проводить, используя измерительные ячейки для анаэробов (измерительные ячейки с серыми крышками). Определение сульфитредуцирующих клостридий возможно также проводить, используя обычные измерительные ячейки (см. примечание).
3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 660A и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой (крышки должны быть приоткрыты!).
4. Приготовить соответствующие разведения продукта, в котором не допускается наличия сульфитредуцирующих бактерий.
5. Внести 1 мл исследуемого образца в измерительные ячейки сразу после автоклавирования, не дожидаясь снижения температуры (приблизительно 85 -С).
6. Закрыть измерительные ячейки крышками.
7. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).
8. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 660A (без инокулята).
9. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения. 10. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ: Образец загрязнен сульфитредуцирующими клостридиями, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М- параметру и 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 ч. На стенках измерительной ячейки должен обнаруживаться выпавший осадок черного цвета.
Примечание. Определение сульфитредуцирующих клостридий возможно также проводить, используя обычные измерительные ячейки и парафиновое масло. Для этого необходимо добавить в каждую измерительную ячейку по 8 мл среды BiMedia 660A и 1 мл парафинового масла (как покрывающий слой) и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой и парафиновым маслом (крышки должны быть приоткрыты!). Далее следует выполнить пункты 4 - 10 по основной методике (см. выше).
3.10. Определение Bacillus cereus
1. Среда: модификация селективной среды Мозеля (готовится в соответствии с инструкцией - см. гл. 10).
2. Протокол измерения.
2.1. Установить температуру 37 -С на приборе "Bac Trac".
2.2. В основном меню программы "Bac Trac" установить следующие параметры:
Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters):
Время исследования (Duration) 24 ч
Масштаб измерений (Scale):
М-параметр 0 - 50%
Е-параметр 0 - 50%
Время задержки (Delay) 1 ч
Пороговые значения (Thresholds):
М-параметр 5%
Е-параметр 10%.
Проводить учет результатов по М-параметру.
Пороговое значение по времени (Time limit) 30 ч.
3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл модифицированной среды Мозеля.
4. Добавить исследуемый образец из соответствующего разведения продукта, в котором не допускается наличие Bacillus cereus.
5. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).
6. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл модифицированной среды Мозеля (без инокулята).
7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения.
8. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки вприбор "Bac Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IД) будут записаны автоматически.
УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ:
Образец загрязнен Bacillus cereus, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру в течение 30 ч.
4. Основные этапы создания калибровочного файла
Для создания калибровочного файла необходимо провести не менее 80 параллельных исследований для одного типа продукции как классическим методом (подсчет КОЕ на чашках Петри), так и автоматическим - с помощью прибора "Бак Трак 4100".
Для этого необходимо:
1. В основном меню программы "Bac Trac" в разделе "Задание пороговых значений" (Thresholds) не указывать пороговые значения (None).
2. Выполнить следующие пункты методики определения мезофильных аэробных и факультативных анаэробных микроорганизмов:
2.1. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 001А.
2.2. Внести 1 мл предварительно подготовленного в соответствии с требованиями нормативной документации исследуемого образца продукта в измерительную ячейку с 9 мл среды.
2.3. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!).
2.4. Для контроля среды используйте одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 001А (без инокулята).
2.5. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (Start Measurement) и начать измерения.
2.6. После того как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Bac Trac".
Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически.
3. Провести параллельный посев исследуемого продукта на чашки Петри с плотной питательной средой для определения КОЕ в 1 мл жидкого или в 0,1 г твердого продукта.
4. По окончании анализа результат высева (КОЕ в 1 мл жидкого или в 0,1 г твердого продукта), полученный на чашках Петри, занести в соответствующий файл данных программы "Bac Trac". Для этого:
4.1. В основном меню программы "Bac Trac" выбрать раздел "Работа с данными" (Data Functions).
4.2. В меню Data Functions выбрать соответствующие файлы исследования данного продукта в разделе "Выбор файлов" (Select files).
4.3. Внести в меню Data Functions в разделе "Ввод численных значений" (Enter values) результаты КОЕ (в 1 мл жидкого или в 0,1 г твердого продукта) для соответствующих исследованных образцов продуктов.
5. После того как будет получено не менее 80 результатов исследования КОЕ для одного типа продукции двумя параллельными методами - классическим (на чашках Петри) и автоматическим – с помощью прибора "Bac Trac", можно приступать к созданию калибровочного файла для данного типа продукта.
6. Основные этапы создания калибровочного файла:
6.1. В основном меню программы "Bac Trac" выбрать раздел "Работа с данными" (Data Functions).
6.2. В меню Data Functions выбрать соответствующие файлы (не менее 80) исследования данного продукта в разделе "Выбор файлов" (Select files) (данные КОЕ в 1 мл жидкого или в 0,1 г твердого продукта должны быть внесены заранее - см. п. 4).
6.3. В меню Data Functions выбрать раздел "Построение калибровочного файла" (Correlation).
6.4. Указать "Пороговое значение" (Threshold) для М- или Е-параметра, по которому будет проводиться построение калибровочной кривой. Как правило, для построения калибровочной кривой используется М-параметр, численное значение которого 5%.
6.5. После задания порогового значения М-параметра необходимо вычислить корреляцию (Calculate).
6.6. Если коэффициент корреляции превышает (-0,85), то данная калибровочная кривая показывает высокую степень корреляции и отвечает требованиям (рис. 4.1 - здесь и далее рисунки не приводятся).
6.6.1. Указать "Пороговое значение по времени" (Time-Limits).
Для этого в полученное уравнение регрессии (уравнение калибровочной кривой) необходимо подставить максимально допустимое значение КОЕ (CFU) в 1 мл для жидкого или в 0,1 г для твердого продукта, взятое из соответствующих нормативных документов. Далее следует вычислить логарифм КОЕ (CFU) и определить из уравнения значение времени - (t). Это и есть величина "Порогового значения по времени" (Time-Limits) для данного продукта.
6.6.2. Теперь данная калибровочная кривая может быть записана на диск (Disk) в виде калибровочного файла (Filename).
6.6.3. При необходимости вносится дополнительный комментарий (Comment) для более детального описания калибровочного файла.
6.7. Если коэффициент корреляции не превышает (-0,85), то необходимо более детально проанализировать полученную зависимость. Как правило, прослеживается общая тенденция - большинство точек находится вблизи калибровочной кривой и имеются лишь отдельные "точки-выбросы", которые расположены вдали от калибровочной кривой. В этом случае необходимо "точки-выбросы" исключить. Это приведет к существенному повышению коэффициента корреляции.
7. После создания калибровочного файла необходимо выбрать данный калибровочный файл при задании пороговых значений Thresholds в главном меню программы "Bac Trac" для автоматического подсчета КОЕ.
5. Исследование пищевых продуктов
Исследование пищевых продуктов проводится по микробиологическим показателям, определяемым в соответствии с "Медико-биологическими требованиями и санитарными нормами качества продовольственного сырья и пищевых продуктов" (МЗ СССР, N 5061-89 от 01.08.89), ГОСТами и другими нормативно-техническими документами. Подготовка проб для исследования осуществляется в соответствии с требованиями нормативной документации, регламентирующей данный этап проведения микробиологических анализов пищевых продуктов (ГОСТ 26669-85, 9958-81, 9225-84 и т.д.). 5.1. Мясные продукты
1) мясо замороженное (говядина, телятина, свинина замороженная куском, птица, фарш говяжий); 2) колбасные изделия (колбасы сырокопченые, полукопченые, варено-копченые; колбасы вареные, сосиски, сардельки, хлеба мясные); 3) мясные вареные и запеченные продукты (окороки, говядина прессованная, баранина в форме, бекон прессованный; буженина, ветчина в оболочке, рулеты); 4) готовые мясные изделия (рубленые изделия, студни, паштеты). Определяемые показатели (указаны для всей группы продуктов): 1) мезофильные аэробные и факультативные анаэробные микроорганизмы; 2) бактерии группы кишечных палочек; 3) сальмонелла; 4) сульфитредуцирующие клостридии; 5) staphylococcus aureus; 6) энтерококки. Для автоматического подсчета KOE (CFU) в 1 г можно воспользоваться коммерческим калибровочным файлом MEAT. COR. Микробиологические показатели для данной группы пищевых продуктов определяются по методикам, представленным в гл. 3 данных Указаний.