10.9. Инструкция по приготовлению среды Pre-Media 403А Pre-Media 403А - обогатительная среда для листерий Pre-Media 403А - Компонент 1. 1. Растворить все содержимое упаковки Компонента 1 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 980 мл, 1960 мл или 4900 мл в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Разделить среду на порции 490 мл. BiMedia 403А - Компонент 2. 3. Растворить все содержимое Компонента 2 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 20 мл, 40 мл или 100 мл в зависимости от объема, указанного на упаковке (1 л, 2 л или 5 л соответственно). 4. Стерилизовать оба компонента (раздельно) при 1 атм. 15 мин. 5. Дать среде остыть до 50 -С или ниже. 6. Добавить 10 мл Компонента 2 к 490 мл Компонента 1 и тщательно перемешать. Получаем ОСНОВНУЮ ПРЕДОБОГАТИТЕЛЬНУЮ СРЕДУ. 7. Добавить 1 флакон аддитива Listeria Selective Supplement (OXOID No.: SR 141E) к 500 мл ОСНОВНОЙ ПРЕДОБОГАТИТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ. Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды (без аддитива) при 4 -С - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.10. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 401А BiMedia 401A для определения листерий в неферментированных продуктах BiMedia 401A - Компонент 1. 1. Растворить все содержимое упаковки Компонента 1 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 0,9 л, 1,8 л или 4,5 л в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Довести рН до 7,0 +/- 0,1, если необходимо. 3. Разделить среду на порции 450 мл. BiMedia 401A - Компонент 2. 4. Растворить все содержимое Компонента 2 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 100 мл, 200 мл или 500 мл в зависимости от объема, указанного на упаковке. 5. Стерилизовать оба компонента (раздельно) при 1 атм. 15 мин. 6. После стерилизации среда должна уравновеситься в течение 6 часов при комнатной температуре. 7. Соединить вместе два компонента в стерильных условиях в соотношении: 450 мл Компонента 1 + 50 мл Компонента 2 = ОСНОВНОЙ РАСТВОР L
8. Добавить 1 флакон аддитива (PALCAM Listeria Selective Supplement - Merck Prod. N 12122), растворенного в 1 мл стерильной дист. воды, к 500 мл ОСНОВНОГО РАСТВОРА. Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды при 4 -С - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.11. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 402А BiMedia 402А для определения листерий в ферментированных продуктах BiMedia 402A - Компонент 1. 1. Растворить все содержимое упаковки Компонента 1 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 0,9 л, 1,8 л или 4,5 л в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Довести рН до 7,0 +/- 0,1, если необходимо. 3. Разделить среду на порции 450 мл. BiMedia 402A - Компонент 2. 4. Растворить все содержимое Компонента 2 в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 100 мл, 200 мл или 500 мл в зависимости от объема, указанного на упаковке. 5. Стерилизовать оба компонента (раздельно) при 1 атм. 15 мин. 6. После стерилизации среда должна уравновеситься в течение 6 часов при комнатной температуре. 7. Соединить вместе два компонента в стерильных условиях в соотношении: 450 мл Компонента 1 + 50 мл Компонента 2 = ОСНОВНОЙ РАСТВОР¦ L
8. Добавить 2 флакона аддитива (PALCAM Listeria Selective Supplement - Merck Prod. N 12122), растворенного в 1 мл стерильной дист. воды каждый, к 500 мл ОСНОВНОГО РАСТВОРА. 9. Теперь среда готова к использованию. Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды (без аддитива) при 4 -С - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.12. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 403А BiMedia 403А - среда определения для листерий 1. Растворить все содержимое упаковки в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 1 л, 2 л или 5 л в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Довести рН среды до 7,3 +/- 0,2. 3. Разделить среду на порции 500 мл. 4. Стерилизовать среду при 1 атм. 15 мин. 5. Дать среде уравновеситься при комнатной температуре не менее 6 ч. 6. Добавить к 1000 мл среды: а) 1 флакон аддитива 1, растворенного в 15 - 20 мл стерильной воды; б) 2 флакона аддитива 2, растворенного в 2 мл стерильной воды (OXOID No.: SR 141E). Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды (без аддитива) при 4 -С - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.13. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 501B BiMedia 501B для определения дрожжей и плесеней 1. Растворить необходимое количество среды в дист. воде (соотношение указано на упаковке). 2. Довести рН среды до 6,0 +/- 0,2. 3. Разделить среду на порции и стерилизовать при 1 атм. 15 мин. 4. После стерилизации среда должна уравновеситься в течение 6 часов при комнатной температуре. Примечания. Приготовленная среда должна храниться при 4 -С. Время хранения - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды!
10.14. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 620A BiMedia 620А для определения лактобацилл 1. Растворить все содержимое упаковки в дист. воде так, чтобы конечный объем составил 1 л, 2 л или 5 л в зависимости от объема, указанного на упаковке. 2. Довести рН до 5,8 +/- 0,2, если необходимо. 3. Разделить среду на порции по 500 мл. 4. Автоклавировать среду при 1 атм. 15 мин. 5. Перед использованием необходимо выдержать среду при комнатной температуре в течение 6 часов. 6. Добавить 1 флакон аддитива (Additive 620A), растворенного в 1,5 мл стерильной дист. воды, к 500 мл основной среды. Примечания. Аддитив следует добавлять непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С до использования. Срок хранения приготовленной среды при 4 -С - 3 недели. Длительное нагревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.15. Инструкция по приготовлению среды BiMedia 660A BiMedia 660A для определения клостридий 1. Растворить все содержимое упаковки в дист. воде (конечный объем - 1, 2 или 5 литров указан на этикетке). 2. Проверить рН среды и, если необходимо, довести рН до 7,1 +/- 0,1. 3. Разделить приготовленную среду на порции и стерилизовать при 1 атм. 15 мин. 4. Дать среде уравновеситься в течение 12 часов при комнатной температуре перед использованием. 5. Внести по 9 мл среды в стерильные измерительные ячейки и поместить ячейки в штатив. 6. Прогревать измерительные ячейки (с приоткрытыми крышками) при 95 - 100 -С на пару в течение 15 мин. (для удаления растворенного в среде кислорода). 7. Дать среде остыть до 50 -С (или меньше), затем можно добавлять аддитив. 8. Добавить 1,5 мл стерильной дист. воды к флакону с аддитивом 660А. 9. Добавить по 30 мкл раствора аддитива в каждую измерительную ячейку с 9 мл среды. Для предотвращения образования воздушных пузырьков не погружайте наконечники автоматической пипетки в среду. Примечания. Аддитив необходимо добавлять только непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитивы при 4 -С. Растворы аддитивов следует хранить не более 2 недель. Приготовленная среда должна храниться при 4 -С не более 2 недель. Длительное прогревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды!
10.16. Инструкция по приготовлению среды для определения Bacillus cereus Модификация селективной среды Мозеля Ниже приводится рецептура (в г/л) модифицированной среды Мозеля для определения Bacillus cereus: 1. Мясной бульон - 10 2. Мясной экстракт - 1,0 3. D(-)-маннитол - 10 4. NaCl - 10 5. Феноловый красный - 25 мг/л 6. Полимиксин В (сульфат) - 0,01 - 0,1 г/л.
11. Методики тестирования и обработки измерительных ячеек
11.1. Методика тестирования измерительных ячеек прибора "Bac Trac 4100" Необходимо каждые несколько месяцев проводить тестирование используемых измерительных ячеек для контроля регистрируемых показателей - изменение проводимости среды (М-параметр) и изменение проводимости вблизи электродов (Е-параметр). Для этого необходимо: 1. В стерильные измерительные ячейки прибора "Bac Trac 4100" налить 10 мл или 100 мл (в зависимости от объема ячеек) стерильный физиологического раствора. 2. Установить время исследования (Duration) - 24 часа. 3. Установить пороговое значение (Threshold) для М-параметра - 5%. 4. Установить значение Time Limit - 23 часа. 5. Начать измерения (Start Measurement). 6. После того как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная (Empty), поместить в инкубаторный блок измерительные ячейки с физиологическим раствором. Учет результатов тестирования. Если за время тестирования измерительных ячеек значения М- параметра не превысили 5%, то ячейки пригодны для дальнейшей работы. Если за время эксперимента в тестируемых ячейках значение М- параметра превысило 5%, то цвет ячейки на экране монитора изменится на красный, что означает - проба "загрязнена" (Contaminated). В этом случае необходимо повторно тестировать ячейку, предварительно поместив ее в любое другое место в инкубаторном блоке. При повторном получении аналогичных результатов (пересечение 5% значения М-параметра) необходимо заменить измерительные ячейки на новые.
11.2. Методика обработки измерительных ячеек прибора "Bac Trac 4100"
11.2.1. Обработка измерительных ячеек после использования. Необходимо обрабатывать измерительные ячейки непосредственно после окончания работы на приборе "Бак Трак". 1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек и поместить измерительные ячейки в металлический штатив. Не автоклавировать плотно закрытые ячейки! 2. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20 - 30 мин. 3. При наличии патогенных микроорганизмов использовать режимную стерилизацию. 4. После автоклавирования дать ячейкам остыть до комнатной температуры. 5. Открыть измерительные ячейки и промыть их дистиллированной водой. 6. Если исследуемый продукт имел жирную консистенцию, то выдержать ячейки в растворе с мягким нейтральным моющим средством (например, хозяйственное мыло) 30 мин. 7. При необходимости промыть измерительные ячейки мягким ершиком так, чтобы не повредить электроды. 8. Если на дне измерительной ячейки остался какой-либо осадок, то его необходимо удалить. 9. Тщательно промыть измерительные ячейки 3 раза водопроводной водой и 2 раза дистиллированной водой. 10. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке образовалась вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и просушить их в разобранном виде в сушильном шкафу при 60 -С в течение 40 минут. 11. Собрать ячейки, верхнюю крышку плотно не закрывать! 12. Измерительные ячейки автоклавировать при 1 атм. в течение 15 мин. Теперь измерительные ячейки готовы к использованию. Примечания. Никогда не используйте моющие средства, содержащие хлор. Тщательно промывайте ячейки, поскольку образование пленок на поверхности электродов вызывает шумы при прохождении сигнала.
11.2.2. Стерилизация измерительных ячеек. 1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек. 2. Поместить измерительные ячейки в металлический штатив. Не автоклавировать плотно закрытые ячейки! 3. Разместить измерительные ячейки в верхней части автоклава для предотвращения попадания воды в ячейки. 4. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20 мин. Никогда не использовать стерилизацию в сухожаровом шкафу. 5. Достать измерительные ячейки из автоклава, как только это станет возможным (приблизительно 70 - 85 -С). Поместить их в термостат на 15 мин. (приблизительно 30 - 60 -С). Возможно также высушить ячейки при комнатной температуре. 6. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке образовалась вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и высушить их в разобранном виде в сушильном шкафу. 7. Убедитесь, что ячейки полностью высохли. При необходимости просушите измерительные ячейки еще раз. Теперь измерительные ячейки готовы к использованию. Примечание. Возможна стерилизация измерительных ячеек с внесенной в них питательной средой.