6.3. Вывод животных разрешается без ограничений при отрицательных результатах исследований по всей группе.
При выявлении хотя бы одного животного, сыворотка крови которого положительно реагирует по РМА или РА, всю группу задерживают в карантине и решают вопрос о благополучии хозяйства по лептоспирозу, для чего проводят исследования, как указано в пункте 2.3. Если хозяйство благополучно по лептоспирозу, то всю группу, в которой выявлены положительно реагирующие животные, обрабатывают стрептомицином (пункт 4.4). Животных, не имеющих специфических антител к лепто-спирам, выводят без дополнительных исследований, а положительно реагирующих оставляют в хозяйстве для дополнительных исследований или откорма с последующим убоем.
Крупный рогатый скот, реагирующий с лептоспирами группы Hebdomadis, обрабатывают стрептомицином и выводят без ограничений. В случае признания хозяйства неблагополучным по лептоспирозу руководствуются при выводе животных пунктами 5.12.6., 5.12.в., 5.12.г.
7. Охрана людей от заражения лептоспирозом
7.1. Руководители хозяйства обязаны:
а) обеспечить всех работников животноводства спецодеждой и спецобувью, включая резиновые сапоги, халаты, прорезиненный фартук, нарукавники, перчатки, косынку или чепчик;
б) обеспечить инструктаж обслуживающего персонала о мерах личной гигиены и промсанитарии при лептоспирозе;
в) иметь в каждом животноводческом помещении (скотном дворе, свинарнике, кошаре и т.д.) умывальник, мыло, полотенце, аптечку первой помощи, емкости с дезратвором (пункт 4.6), а также помещения, оборудованные для хранения спецодежды и спецобуви;
г) иметь в хозяйстве санитарный журнал для записи указаний «предложений специалистов ветеринарно-санитарного надзора и органов здравоохранения, обеспечить выполнение сделанных указаний и предложений;
д) при появлении заболевания лептоспирозом среди животных немедленно принять меры по предупреждению заражения людей и оказанию помощи по выявлению источников возбудителя инфекции.
7.2. Лица, обслуживающие животных в неблагополучных по лептоспирозу хозяйствах, должны выполнять правила личной профилактики и быть вакцинированными против лептоспироза.
Методические указания по лабораторной диагностике лептоспироза
Диагноз на лептоспироз устанавливают бактериологическим, серологическим и гистологическим методами исследования с учетом эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных и проведением дифференциальной диагностики.
1. Бактериологическая диагностика лептоспироза
Бактериологическая диагностика основана на обнаружении лептоспир в исследуемом материале путем микроскопии или выделения культуры и складывается из следующих этапов:
– взятие патологического материала;
– микроскопия в темном поле микроскопа;
– выделение культур лептоспир посевом в специальные среды или биологической пробой на лабораторных животных;
– идентификация и дифференциация выделенных культур.
1.1. Порядок взятия материала для лабораторного анализа
1.1.1. Материалом для прижизненной диагностики служат кровь и моча, для посмертной – трупы мелких животных. От трупов ирупных животных берут сердце, кусочки паренхиматозных органов, почку, транссудат из грудной и брюшной полостей, перикардиальную жидкость, мочевой пузырь с содержимым, спинномозговую жидкость.
Абортированный плод доставляют в лабораторию целиком или берут желудок с содержимым и паренхиматозные органы плода.
1.1.2. Мочу собирают при естественном мочеиспускании в чистые пробирки, закрепленные на проволоке, или в банки, чашки Петри, кружки и т.д. Легче всего брать пробы после утреннего подъема животных, а у свиней в любое время дня после 1–2-часового лежания. У коров и свиноматок мочу можно брать катетером.
1.1.3. Кровь в количестве 3–5 мл берут для бактериологического исследования в период лихорадки на 1–7-й день болезни, для серологического исследования – 5–10 мл и не ранее чем через 5–7 дней после проявления клинических признаков болезни или через 60 дней после введения вакцины.
1.1.4. Почку извлекают в невскрытой капсуле. Сердце, мочевой пузырь и желудок плода берут с содержимым, для чего накладывают лигатуры на соответствующие сосуды и сфинктеры. Каждый орган или кусочек органа завертывают отдельно в пергамент.
1.1.5. Ликвор, транссудат, спинномозговую жидкость и другие жидкие субстраты насасывают стерильным шприцем или пипеткой в стерильные пробирки.
1.1.6. Воду из водоисточника для обнаружения лептоспир берут в объеме 1,5–2 л в стерильные колбы с ватно-марлевыми пробками.
1.1.7. Взятый материал помещают в ящик, опечатывают и направляют в лабораторию с нарочным.
1.1.8. Патологический материал должен быть взят и исследован в течение 6 часов в летнее время и 10–12 часов – при условии хранения его в охлажденном состоянии.
1.1.9. Микроскопия мочи должна быть закончена при температуре 30–40 °С в течение 3 часов, 25–30 °С – 4– 5 часов, 20–25 °С – 6–8 часов, 16–20 °С – до 10–12 часов с момента взятия.
Вероятность обнаружения лептоспир в исследуемом материале в более поздние сроки не исключена, но значительно снижается.
1.1.10. Ветеринарный специалист, направляя материал в лабораторию для исследования на лептоспироз, должен рассчитывать, чтобы взятие материала, доставка в лабораторию и проведение исследования укладывались в сроки выживания лептоспир в патологическом материале, в противном случае ответ будет заведомо отрицательным.
В сопроводительной к патологическому материалу должно быть указано время гибели животного или время взятия пробы при жизни.
1.2. Микроскопическое исследование
1.2.1. Для микроскопического исследования на лептоспироз необходимы:
– биологический микроскоп (МБИ-3, МБИ-1, МБИ-11 и др.);
– конденсор темного поля (ОИ-7, ОЙ-13 и др.);
– осветитель (ОИ-19, ОИ-21 и др.) с точечной лампой;
– предметные стекла толщиной не более 0,8–1,1 мм;
– покровные стекла стандартные.
Стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов.
1.2.2. Порядок микроскопии в темном поле следующий. Осветитель соединяют с микроскопом соединительной планкой. Передвигая лампочку осветителя, фокусируют свет на центре плоского зеркала микроскопа. При этом четко должны быть видны завитки спирали. Верхнюю линзу конденсора устанавливают на уровне предметного столика. Центрируют конденсор с помощью регулировочных винтов по оптической оси микроскопа. На верхней линзе конденсора при правильной установке виден равномерно освещенный круг.
Препарат для микроскопических исследований готовят по принципу раздавленной капли. Небольшой объем исследуемого материала наносят пипеткой или бактериологической петлей на предметное стекло и накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. На одном предметном стекле готовят три раздавленные капли.
На верхнюю линзу конденсора наносят каплю дистиллированной воды и устанавливают препарат для микроскопии. Пространство между линзой конденсора и предметным стеклом должно быть заполнено тонким слоем воды, без пузырьков воздуха, что уменьшает рассеивание световых лучей. Фокус конденсора должен находиться в плоскости препарата. Конденсор при этом обычно вплотную прилегает к стеклу. Иногда в зависимости от толщины препарата его приходится опускать на 0,5–1 мм.
Микроскопируют исследуемый материал при увеличении 40X7–10 и 20X1,5X7, а для более детального рассмотрения препарата–при увеличении 40ХЮ-15 или 40X1,5X10.
1.3. Характеристика лептоспир
1.3.1. Лептоспиры при рассмотрении в темном поле микроскопа представляют собой спиралеподобные тонкие серебристые нити, – концы которых, оба или один, загнуты и булавовидно утолщены. Встречаются и бескрючковые формы лептоспир. Лептоспиры подвижны. В жидких средах обычными формами движения являются: вращательное, прямолинейное поступательное с одновременным вращением вокруг собственной оси и круговые. Одна и та же особь может совершать и вращательные и поступательные движения.
1.3.2. Морфология и характер движения настолько типичны, что позволяют безошибочно распознавать лептоспир в патологическом материале. Кроме того, лептоспиры при микроскопии в отличие от других микроорганизмов никогда не бывают блестящими.
1.3.3. Возможность безошибочной дифференциации лептоспир от микроорганизмов других видов по морфологическим признакам дает право при лептоспирозе устанавливать диагноз только на основании микроскопических исследований, без последующего выделения чистых культур и их идентификации.
1.4. Микроскопия мочи
1.4.1. Мочу микроскопируют в нативном виде или после центрифугирования. Прозрачную мочу, не содержащую кристаллов солей, хлопьев, спермиев и других посторонних частиц, центрифугируют при 10–15 тыс. об/мин в течение 30 минут, сливают надосадочную жидкость, осадок ресуспензируют в оставшейся капле мочи и микроскопируют.
Мочу, содержащую значительное количество посторонних частиц, очищают центрифугированием при 3 тыс. об/мин в течение 10 минут, затем сливают надосадочную жидкость и центрифугируют ее для осаждения лептоспир при 10–15 тыс. об/мин в течение 30 минут.
При массовом исследовании животных в хозяйстве готовят по одной, а при наличии немногих животных – не менее трех раздавленных капель из каждой пробы мочи. Просматривают 50 и более полей зрения в каждой капле.
1.4.2. Лептоспир с активной подвижностью обнаруживают примерно в 50% положительных проб, в остальных случаях они неподвижны и довольно часто имеют измененную морфологию. Количество их также бывает различным. В моче примерно у 30% животных – лептоспироносителей содержатся по 1–2, реже по 5–7 и очень редко по 10–15 лептоспир в каждом поле зрения, в 30 – 35% ' случаев удается обнаружить 1–2 лептоспиры в 5–'10 полях. В остальных случаях выявляют 1–2 лептоспиры в 20–50 и более полях зрения.