Химическая изоляция материнских клеток пыльцы в стадии тетрад от окружающей диплоидной цитоплазмы является необходимой предпосылкой нормального развития пыльцы [94]. Установлено, что меченый тимидин поступает в материнские клетки пыльцы только до формирования каллозной оболочки, но не проникает, если они заключены в каллозу [72]. При изменении последней и освобождении тетрад метка свободно поступала в микроспоры. Эти наблюдения позволили сделать вывод о функционировании каллозной оболочки как «молекулярного фильтра».
Каллозное покрытие материнских клеток пыльцы функционировало как молекулярное сито: каллоза пропускала глюкозу и углекислый натрий, но задерживала фенилаланин, размер молекулы которого гораздо меньше глюкозы и он 22
должен был бы легко проникать в материнские клетки пыльцы [123]. Выводы J. Heslop-iHarrison и A. Mckenzie [72] также сомнительны, так как метка могла не включаться ввиду отсутствия синтеза ДНК. В других исследованиях показано, что роль каллозной оболочки значительно сложнее, чем «простого молекулярного фильтра» [4, 130].
ПОСТУПЛЕНИЕ В РАСТЕНИЯ И РАСПРЕДЕЛЕНИЕ В НИХ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
Для успешного поиска химических соединений, обладающих высокой селективностью гаметоцидного действия, необходима информация о поступлении и распределении экзрген-но наносимого на стебли и листья препарата. Степень поступления и скорость распределения химических соединений зависят от морфо-физиологических особенностей листовой пластинки, химических характеристик наносимого препарата, окружающих условий и других факторов. У различных видов культурных растений, с которыми проводили эксперименты с целью химической индукции мужской стерильности, в значительной степени варьирует толщина кутикулы и соотношение ее компонентов (воск, кутан, пектин, целлюлоза), а также внешняя эпидермальная оболочка [44, 56, 60, 65, 69, 75].
С помощью химических методов анализа исследовали ку-тикулярный слой листьев 24 видов овощных и плодовых культур [77]. Установлено разнообразие в составе и соотношении веществ листовой поверхности и значительные различия в толщине и составе мембраны кутикулы. Однако основные структурные компоненты кутикулы характерны для всех растений. Кут.ин представляет собой полимолекулярную сеть гид-рокси-карбокоильных кислот с простыми и сложными эфирными связями. С кутанным матриксом связаны полисахар.иды и кутикулярный и этикулярный воск, богатый алканами. Так как в кутикуле имеются полярные и неполярные группы, она обладает как гидрофильными, так и липофильными свойствами [45].
Одним из важных факторов, определяющих степень эффективности действия гаметоцида, является зависимость его. активности от климатических и погодных условий, которые необходимо учитывать при разработке доз и концентраций для конкретных возделываемых культур и представляющих их сортов. Однако до сих пор не удалось установить четких взаимосвязей между влиянием условий среды и проницаемостью листовой поверхности, хотя развитие кутикулы коррели-
23
рует с продолжительностью светового периода, инсоляцией, влажностью почвы и воздуха, температурой [81].
Температурный режим является одним ,из самых определяющих условий развития кутикулы и распределения наносимого препарата [83]. При нанесении препарата в разные фазы органогенеза следует учитывать, что с возрастом листа снижается абсорбционная способность. Р. М. Nelson и R. К. Reidfl05] доказали, что метиловые эфиры жирных кислот — Lg-ii вызывают гибель меристематических тканей, но не разрушают более зрелые ткани. Механизм такой селективности основан на способности кутикулы действовать как барьер проницаемости по отношению к наносимому препарату. Это было подтверждено разрушением кутикулы до нанесения эмульсии (4%-ный метил-деканоат+0,1%-ный твин 20). Гибель ткани (ожоги) — результат нарушения структуры мембран. Авторы считают, что твин снижает проницаемость кутикулы и плохо проникает через кутикулу зрелых листьев.
Поверхностное применение гаметоцидных препаратов с использованием радиоактивной метки показало, что при нанесении на лист гаметоциды быстро транслокализуются в репродуктивные органы. Нанесение химикатов на базальную часть листа обеспечивало более полное поглощение препарата, чем на апикальную часть. В репродуктивных тканях активно аккумулировались гаметоциды.
Наиболее подробно абсорбционные особенности химических препаратов изучали на гербицидах. Детально были исследованы ответные реакции растений двух сортов капусты, характеризующиеся различной чувствительностью к нитрофе-ну (2,4-дихлорфенил-р-нитрофениловый эфир) [113]. У обоих сортов не было обнаружено заметных различий в скорости прорастания семян, росте растений, плотности устьиц листьев и в транслокализации меченого '^С гербицида. Однако у растений устойчивого к препарату сорта листья обладали более восковидной поверхностью, что позволило сделать вывод о корреляции между блокированием абсорбции и содержанием воска в кутикуле.
Проникновение соединений в ткани листа обусловлено и другими факторами, характеризующими применяемый раствор: температурой, концентрацией, продолжительностью времени его соприкосновения с поверхностью растений, поверхностным натяжением и др. Проникновение веществ возрастает пропорционально времени и концентрации. Поступление соединения из раствора в ткани листа осуществляется до тех пор, пока его доза на поверхности листа или под кутикулой не станет предельной. В полевых условиях эффективность действия и поступление нанесенного препарата зависят от
24
сложного взаимодействия климатических факторов и внутренних физиологических тканевых параметров (водный дефицит, значение рН в клетке, концентрация цнтоплазматиче-ского сока и т. д.).
В ткани листа легче проникают недиссоциирующие молекулы. Повышение температуры от 10 до 30° увеличивает проницаемость кутикулы и мембран, за исключением промежутка между 15" и 25°, в пределах которого поступление носит относительно стабильный характер. Если опрыскивание проводят под давлением, растворы проникают в основном через устьица, однако вещества с поверхностным натяжением, близким к поверхностному натяжению воды (70 дин/см2), через устьица не проникают ,[54].
При селективности абсорбции у наиболее распространенных видов сельскохозяйственных культур по отношению к 2,4Д (который обладает и гаметоцидными свойствами) установлено, что толщина кутикулы является решающим фактором, а толщина и структура оболочек эпидермальных клеток не имеют определяющего значения для степени абсорбции препарата. При этом абсорбционные характеристики старых и молодых листьев значительно отличались и в обоих случаях зависели от химических свойств препарата.
На проростках конских бобов поглощение листьями меченого по углероду '^'^^-хлор-о-толил) окиси] бутиловой кислоты было одинаковым для листьев всех возрастов. Однако замена бутиловой кислоты на радикал уксусной кислоты вызывала различия в поглощении молодыми (скорее) и более зрелыми (медленнее) листьями [92]. Таким образом, даже слегка измененная конфигурация молекулы может в значительной степени повлиять на ее способность проникать через мембраны [126].
Пока не установлено четкой взаимосвязи между химическими, физическими характеристиками и проницаемостью препарата в системе клеток.
С помощью энзиматически изолированной кутикулы листьев была создана шкала проницаемости кутикулы по отношению к ряду алифатических спиртов и их амидов [138]. Соединения выбирали по способности растворять липиды и по моле< кулярньш весам. Результаты опытов показали, что кутикула функционирует в основном как липоидная мембрана, позволяющая веществам проникать в клетку пассивной диффузией согласно их растворимости в липидах. Модель молекулярного сита больше подходит для молекул малых размеров. Коэффициенты проницаемости алифатических спиртов располагаются от этанола к пентанолу: этанол<метанол<пропа-
25
нол<бутанол<пентанол, а в случае амидов: ацета1мид<про-пионамид<.бутиламид<1валерам:ид [121].
Однако при подборе алкильных групп для улучшения абсорбция препарата следует также учитывать возрастание фитотоксичности соединения. При исследовании действия четырех о-алкилметилфосфонофторидов на проростках пшеницы была отмечена зависимость фитотоксичности от природы о-алкильной группы, которая усиливалась в следующем порядке: этил<изопроп'ил<пипаколил<циклогексил. При этом продукты разложения были менее токсичны [79].
Методами газовой хроматографии и с помощью сцинтил-ляционного счетчика изучали различия в абсорбции буто-ксиэтилового эфира и соли аммония 2,4,5-Т (2,4,5-трихлорфе-ноксиуксусная кислота). Сравнимые результаты показали, что абсорбция 2,4,5-Т была в 2—3 раза выше при использовании препарата в форме эфира, чем в форме солей. Однако их передвижение в проводящих системах растения не зависело от химической формы соединения [100].
В опытах с энзнмат.ически изолированной кутикулой плодов томата, которая по своим характеристикам близка к кутикуле листа, степень хлорирования (но не положение хлора при замещении) феноксиуксусной кислоты увеличивала проницаемость ее галогенопроизводных в следующем порядке:
2,4,5- и 2,4,6-трихлорфеноксиуксусная кислота >2,3- и 3,5-ди-хлорфеноксиуксусная >2-хлорфенокоиуксусная>фенокс.иук-сусная кислота. Чем больше полярность феноксиуксусной кислоты, тем легче она проникает через мембраны [53]. Хлорирование увеличивает растворение феноксиуксусной кислоты в л.ипидах и тем самым способствует ее проникновению через кутикулу [127].
Хлорирование бензойной кислоты, наоборот, снижает степень проникновения через кутикулу, и шкала ее проницаемости располагается в нисходящем порядке: 2-хлорбензойная кислота, 2,4- и 2,5-дихлорбензойная и 2,3,6-три.хлорбензойная кислота. J. L. Stoddart [132] объясняет это низкой растворимостью галогенопроизводных бензойной кислоты при заданных рН (2,5; 3,5 и 5,2) в липидах. Степень хлорирования, фто-рирования и метилирования препаратов обусловливает их биологическую активность и токсичность действия на растительный организм.