Таблица 1
Влияние регулятора роста на окислительное фосфорилирование при обработке
изолированных митохондрий стеблей гороха
(по Г. М. Живухиной и Н. И. Якушкиной, 1966 г.)
| О | Р | Р/О | ||||||
| конт роль | индолил-уксусная кислота | гиббере-линовая кислота | контроль | индолил-уксусная кислота | гибберелиновая кислота | контроль | индолил-уксусная кислота | гиббере-линовая кислота |
| 0,94 1,801,82 | 1,35 2,10 2,40 | 2,0 2,55 1,92 | 0,68 0,91 1,04 | 2,03 1,80 3,68 | 2,03 1,80 1,33 | 0,730,51 0,61 | 1,500,87 1,53 | 1,0 1,070,69 |
ДЫХАНИЕ КЛЕТОК НА РАЗНЫХ ФАЗАХ РОСТА.
Совершенствование методов исследования сделало возможным изучение дыхания отдельных микроскопических участков тканей и облегчило выяснение значения фазы роста клеток для характера дыхательного процесса. Уже первые исследования, проведенные в этом направлении, дали ряд интересных и неожиданных результатов: оказалось, что не всегда более молодые клетки дышат интенсивнее, как можно было ожидать на основе данных, полученных при грубом сравнении дыхания органов разного возраста.
Дыхание меристематических тканей растений отличается рядом своеобразных особенностей. Это впервые показали Рулянд и Рамсгорн (1938), изучая дыхательный газообмен различных меристем (кончики корней бобов, камбий сирени и липы). Эти ученые обнаружили, что этим тканям свойственно аэробное брожение, т. е. наряду с кислородным дыханием в них осуществляется процесс спиртового брожения. Оказалось, что в камбии и кончиках корней содержится небольшое количество этилового спирта и уксусного альдегида. Дыхательный коэффициент этих тканей оказался повышенным и иногда достигал нескольких единиц
Как видно из приведенных данных, поглощение кислорода в меристемах значительно меньше по сравнению с клетками, перешедшими к растяжению или закончившими рост. Дыхательный коэффициент в камбии и кончиках корней всегда выше единицы и обычно резко уменьшается при переходе к зоне растяжения вследствие усиления поглощения кислорода.
При расчете на единицу белкового азота цифры поглощения кислорода были бы еще ниже по сравнению с другими тканями.
Увеличение меристематической активности (ускорение клеточных делений), что достигалось в исследованиях Рулян-да и Рамсгорна воздействием гетероауксина, приводит к еще более высоким величинам ДК, обусловленным снижением поглощения кислорода. Одновременно при применении стимулятора увеличивается накопление продуктов спиртового брожения.
Г. Ваннер (1950) и др., изучая дыхание в разных срезах корней пшеницы, обнаружили, что в зоне растяжения при расчете на единицу белкового азота кислорода поглощается почти в три раза больше, чем в меристематической зоне. Это позднее было подтверждено опытами Л. Элиассона , 1955). Ваннер, 1950) получил подобные результаты для корней лука, Г. Балдовинос (, 1953) и Д. Р. Годдард и Б. Дж. Меуз (, 1950) — для корней кукурузы. Годдард и Меуз обнаружили, что в меристематической зоне корней интенсивность дыхания при расчете на единицу азота низкая, в зоне растяжения она сильно возрастает и достигает максимума, а после прекращения роста снижается до постоянного уровня. Р. Броун иД. Броадбент ,( 1950) не нашли столь значительных различий в интенсивности дыхания разных зон роста корней гороха. Таким образом, переход клетки от эмбрионального состояния к фазе растяжения обычно связан со значительным активированием кислородного дыхания. Причина этих изменений дыхания пока остается неясной. Некоторые исследователи считают, что более интенсивное дыхание зоны растяжения является следствием того, что эта фаза роста клеток помимо поглощения воды, накопления осмотически активных веществ и роста клеточных оболочек связана также с интенсивным новообразованием цитоплазмы (Броун и Броадбент, 1950 и др.).
С приведенными данными вполне согласуются наблюдения над влиянием парциального давления кислорода на распускание древесных почек: у некоторых деревьев, например у каштана, почки скорее трогаются в рост при пониженном содержании кислорода — до 2—5об.%. Многие способы ранней выгонки связаны с временным усилением анаэробных процессов.
Смирнов (1943), изучая дыхание зерна пшеницы при разной влажности, нашел, что дыхательный коэффициент сухого зерна выше; он относил это за счет дыхания зародыша. Особенности дыхания растительных меристем интересно сопоставить с данными, характеризующими обмен веществ на разных фазах митотического деления клеток. Штерн (1959) считает, что митоз можно отнести к числу немногих функций, осуществление которых в клетках, нормально являющихся аэробными, частично или полностью возможно в отсутствие кислорода. У аэробных организмов во многих случаях, хотя и не всегда, доступ кислорода является существенным условием, способствующим митозам, но даже в случае наличия потребности в кислороде эта потребность снимается перед окончанием профазы, а у некоторых клеток и при вхождении в профазу, после чего до самого завершения митотического цикла клетки не нуждаются в доступе кислорода (В. С. Буллоу— 1952). В этом отношении наблюдается неоднородность реакций даже среди аэробных клеток: у некоторых потребность в кислороде обнаруживается только на протяжении части профазы, у других—вся профаза проходит без кислорода, а у некоторых клеток уже перед началом профазы эта потребность утрачивается.
Варбург (1956) высказывал предположение, что причина рака заключается в нарушении дыхательных систем, приводящих к нарушению дифференциации тканей при сохранении высокой активности митозов. Действительно, для многих опухолей характерно наличие интенсивного гликолиза при слабом дыхании (см. сводку Штерн, 1959). Однако Штерн считает, что возникновение подобных аномалий обмена чаще является следствием, чем причиной канцерогенезиса.
Неодинаковое отношение к кислороду митотического процесса у разных клеток пока еще не получило своего объяснения. Некоторые исследователи предполагают, что здесь может сказываться конкуренция в потреблении кислорода разными клеточными органоидами, изменяющаяся при дифференциации тканей (Штерн,1959). Благоприятное влияние дыхания на митотические движения отмечалось многими, оно возникает вследствие образования богатых энергией соединений, прежде всего АТФ. Однако пока еще неясна роль образуемой при дыхании АТФ в процессе разделения хромосом. Если бы гликолиз не прекращался во время митоза, то он один был бы способен обеспечить энергией этот процесс, как предполагает Браше (1955 и др.). Однако пока еще нельзя считать доказанным, что гликолитический механизм остается активным на протяжении всех этапов митоза; имеется ряд фактов, говорящих об обратном. Например, микроспоры во время митотического интервала обладают очень слабой способностью вызывать распад сахара ферментами, катализирующими первичные реакции гликолиза, хотя в другое время эти ферменты у них очень активны.
В пыльниках лилейных во время деления ядер наблюдается резкое падение потребления кислорода в микроспороцитах и микроспорах, что подтвердилось и в опытах с суспензиями микроспор (Р. О. Эриксон— 1947; Штерн и П. Л. Кирк — 1948 и др.). В синхронно делящейся культуре обнаружено прекращение поглощения кислорода во время деления клеток. Однако подобное явление наблюдается не всегда: у морских ежей нет подобного резкого снижения потребления кислорода клетками в момент деления, что, вероятно, связано с большой массой цитоплазмы у их яйцеклеток (Штерн, 1956, 1959).
Предполагается, что нарушения синтетических процессов во время митотического деления клеток являются следствием временного ослабления активности аэробных систем, имеющих значение в образовании богатых энергией соединений. Для объяснения сравнительно малой потребности митотического процесса в снабжении энергией существуют разные предположения. Как уже упоминалось, существует точка зрения Варбурга, заключающаяся в том, что гликолиз может служить единственным источником энергии для митоза. Буллоу (1952) -предполагает, что до наступления митоза предварительно создается резервуар энергии за счет аэробных процессов. Штерн (1959) считает, что дезорганизация ядра во время митоза каким-то образом прекращает функционирование митохондрий. Это пока трудно достаточно ясно истолковать потому, что здесь было бы неправильно полагаться на аналогии с влиянием удаления ядра в опытах Браше (1955 и др.). Изменения состояния клетки и ее отдельных органоидов во время митоза своеобразны и трудно сравнимы со всякими другими состояниями, искусственно вызываемыми при выделении безъядерных фрагментов и т. д.
Для деления клеток характерны понижение окислительно-восстановительного потенциала и высокий уровень восстановленности, что было замечено для эмбриональных тканей животных (Вюрмзер, 1935 и др.), а также для растительных меристем, которым, присущи спиртовое брожение, высокий дыхательный коэффициент и сравнительно невысокая интенсивность поглощения кислорода (Рулянд и Рамсгорн, 1938; Ваннер, 1950; Элиассон, 1955 и др.). Здесь, вероятно, имеет значение характер биосинтезов, происходящих хотя и не в период самого деления клетки, а, по-видимому, во время интерфазы, но без совершения которых не может осуществляться митотический процесс. Имеется в виду синтез ядерной нуклеиновой кислоты — дезоксирибонуклеиновой (ДНК), содержание которой должно удвоиться, иначе не может происходить деление. ДНК характеризуется высоким уровнем восстановленности: в состав ее нуклеотидов входит дезоксирибоза— пентоза, отличающаяся от рибозы при равном числе водородных атомов меньшим числом кислородных. Кроме того, в отличие от РНК, ДНК имеет в своем составе тимин (вместо урацила в РНК), который отличается от урацила большим числом метальных групп. Высокий уровень восстановленности говорит о необходимости больших затрат энергии на синтез ДНК. Кроме того, самый характер биосинтеза ДНК требует предварительного аккумулирования значительных количеств энергии макроэргических связей, которые могли бы обеспечить этот синтез своевременно и быстро. Действительно, имеющийся фактический материал, характеризующий условия, влияющие на деление клеток, показывает, что для интенсивного деления их необходима высокая активность процессов, способных обеспечить запасание энергии макроэргов. У растений все условия, способствующие фотосинтетическому или дыхательному фосфорилированию, благоприятствуют интенсивному делению клеток, высокой активности меристем. Наоборот, все факторы, угнетающие энергетические процессы: недостаток света, недостаток фосфора при избытке азота, воздействие специфическими ингибиторами дыхательных ферментов, или ингибиторами фосфорилирования, высокими концентрациями ауксинов, угнетающими фосфорилирование, и т. д., приводят к торможению деления клеток, уменьшая синтез ДНК. Следствием подобных условий является обычно увеличение отношения РНК/ДНК при снижении общего содержания нуклеиновых кислот (Туркова и др., 1960 и др.).